8.气相色谱技术总结.ppt

8.1 概述 一.色谱的产生： 1.由Tsweet于1906年创立。Tsweet在研究植物液色素成分时，将植物液的浸取液加到一根填充了碳酸钙的竖立玻璃管中，浸取液中的色素被吸附到碳酸钙上，然后用石油醚冲洗，结果发现在玻璃管内的色素被分离成几个具有不同颜色的色带。他将这种分离方法称为“色谱法”，色谱由此得名。在此后的20多年里，几乎无人问津这一技术。到了1931年，Kuhn等用同样的方法成功地分离了胡萝卜素和叶黄素，从此，色谱法开始为人们所重视，此后，相继出现了各种色谱方法。 2.GC是英国生物化学家Martin等在液-液分配色谱的基础上，于1952年创立的一种极为有效的分离方法。 3.Golay(戈雷）1956年发明了毛细管色谱柱，使得气相色谱分离得到了很大的发展。 4.Holmes(霍姆斯）1957年成功实验气相色谱与质谱联用（GC－Mass)。 二. 气相色谱法的定义： GC是一种以气体为流动相的柱色谱法.根据所用的固定相状态不同,可分为气固色谱和气液色谱. 固定相（stationary phase):色谱法中，填入玻璃管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相。如离子交换树脂法中的树脂相。 流动相(mobile phase):自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相。 色谱柱(chromatography column):装有固定相的管子称为色谱柱。 三. 色谱的分离原理： 流动相带着样品流经固定相，由于样品在固定相之间的溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，样品在两相间进行反复多次地分配过程，使得原分配系数具有微小差异的各组分，在固定相中的移动速度不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，先后流出色谱柱。 五. 色谱法的分类（一）：按两相的物理状态分类 色谱法的分类（二）：按固定相存在状态分类 色谱法的分类（三）：按照分离原理分类 1. 基线与基线漂移 基线：在色谱操作条件下，仅有流动相通过监测器时，由记录仪得到的信号－时间曲线。 基线漂移：基线随时间定向缓慢地变化。 2.死时间与死体积 死时间（dead time）：不被固定相吸附或溶解的惰性组分，从进样到出峰的峰顶点之间测得的时间，以tM表示。 死体积（dead volume）：死时间内流动相流经色谱柱的体积，又指色谱柱填充固定相后的空隙体积。 3.保留时间、调整保留时间、保留体积、调整保留体积 保留时间（retention time）:从进样到组分峰顶点之间测得的时间，用tR表示。 调整保留时间（adjusted retention time）：组分的保留时间扣除死时间后的时间。 保留体积（retention volume）：从进样开始到监测器中样品浓度最大时，流动相流经色谱柱的体积。 调整保留体积（adjusted retention volume）:保留体积扣除死体积后的体积。 4.相对保留值 相对保留因子γ21 （relative retention value)：组分2与基准组分1的调整保留时间之比. 5. 色谱峰的区域宽度 色谱峰的区域宽度： 标准偏差σ:σ为正态分布曲线上两拐点距离的一半。正常峰有σ为0.607倍峰高处的色谱峰宽的一半。 半峰宽Y1/2=2.354σ：峰高一半处色谱峰的宽度。 峰宽或基线宽度Y=4σ：通过峰两侧的拐点做切线与峰底相交的宽度。 6.分离度 分离度也称分辩率。它是指相邻两色谱峰保留值之差与两峰底宽平均值之比。 一般情况下，当R1时，两峰总有部分重叠；当R＝1时，两峰能明显分离；R＝1.5时，两峰已完全分离。更大的R值，分离效果会更好，但会延长分析时间。 若在1m长的色谱柱上测得分离度为0.68，要使它完全分离，则柱长至少应为多少米？ 8.2.2 塔板理论 塔板理论认为，一根柱子可以分为n段，在每段内组分在两相间很快达到平衡，把每一段称为一块理论塔板。色谱柱塔板高度用H表示，K小的先出柱，K有微小差异组分仍可获较好分离。 （一）塔板理论四个基本假设 （二）理论板数和理论塔板高度的计算 （一）塔板理论的四个基本假设 1．在柱内一小段高度内组分分配瞬间达平衡 （H→理论塔板高度） 2．载气非连续而是间歇式（脉动式）进入色谱柱， 每次进气一个塔板体积 3．样品和载气均加在第0号塔板上，且忽略样品 沿柱方向的纵向扩散 4．分配系数在各塔板上是常数 （二）理论板数和理论塔板高度的计算 理论塔板高度H——为使组分在柱内两相间达到一次分配平衡所需要的柱长 理论塔板数n——组分流过色谱柱时，在两相间进行平衡分配的总次数 续前 小结 1．塔板理论的贡献： 从热力学角度