种子衰老的蛋白质变化概念.pptxVIP

种子老化过程--蛋白组的变化 研究背景 种子衰老是各种理化反应的综合结果，目前被广为接受的是主要的自由基膜脂过氧化和美拉德反应。简称自由基—美拉德反应学说。这两种反应都会造成蛋白质的降解引起种子的衰老。 自由基氧化导致衰老的机制 众所周知，自由基会氧化膜磷脂上的不饱和脂肪酸，导致膜双分子层结构变化，膜完整性破坏，蛋白质降解，遗传物质发生改变， 引起种子衰老。 美拉德反应导致衰老的机制 美拉德反应产物造成种子衰老： 种子老化过程中能检测出美拉德和阿马多瑞非酶促反应的产物。这些产物能够降低抗氧化酶的活性、修饰蛋白质、核酸的结构和功能以及影响种子中糖代谢等途径引起种子衰老。 美拉德反应 反应产物 自由基膜质 过氧化 导致 种子蛋白质发生巯基氧化、错误折叠、脱氨基化、交联反应衰老 种子衰老 研究的意义 理论上，自由基膜脂过氧化和非酶糖基化，其产物及其引起的羰基毒化物导致贮藏蛋白质与酶氧化分解、抗氧化酶活性降低、蛋白质发生各种修饰，最后引起种子老化。在多种植物老化的种子，都检测到了蛋白质和酶的变化。 因此，在种子衰老过程中，研究其蛋白组的变化很有意义。 研究的材料和方法 材料：郑单958玉米种子 方法：通过提取蛋白质并跑 SDS凝胶电泳， ，对老化处理0到6天的玉米种胚、胚乳进行蛋白质的单向与双向电泳分析，观察蛋白组的变化。 另外，从种胚中分离的胚芽、胚根和子叶各0.2ｇ，提取出其中的蛋白质。 通过这个研究可以发现，玉米种子胚乳的蛋白质变化不明显，种胚的蛋白质在人工老化6d后明显变化，在指示的10个明显变化的多肽点大部分多肽位点明显降低，一部分多肽位点消失，少部分多肽位点增加。 实验结果 　玉米种胚蛋白质单向电泳 左图显示，在老化种子的种胚中,14和40ｋＤ(图1,△和＊标记)蛋白质条带的丰度有明显变化： 14ｋＤ多肽在老化1ｄ后即明显下调,至老化2ｄ后几乎完全消失;而40ｋＤ多肽在老化5ｄ后消失. 实验结果 分别提取将老化0和6ｄ的胚芽、胚根和子叶中的蛋白质，ＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析发现(图2，＊和＊所示)，14ｋＤ差异蛋白主要出现在胚根和子叶中，40ｋＤ差异蛋白在胚芽、胚根和子叶中都存在，这2种多肽可能作为种子失活的标记。 实验结果 A、B、C老化0天，即对照组； a、b、c是老化6天的实验组，三个字母分别代表了胚芽胚根、子叶。 玉米种胚蛋白质双向电泳分析 老化6ｄ的种子胚中蛋白质点1ａ(14ｋＤ,ｐＩ6.2),3ａ(30ｋＤ,ｐＩ5.8),4ａ上(36ｋＤ,ｐＩ5.5),4ａ左(35ｋＤ,ｐＩ5.5)和9ａ(22ｋＤ,ｐＩ5.1)多肽丰度显著下调。 实验结果 2ａ(40ｋＤ,ｐＩ6.5),5ａ(29ｋＤ,ｐＩ6.4),6ａ(15ｋＤ,ｐＩ5.4),10ａ(21ｋＤ,ｐＩ5.3)和4ａ右蛋白质点(35ｋＤ,ｐＩ5.6)的多肽消失。 而7ａ(20ｋＤ,ｐＩ6.5),8ａ(20ｋＤ,ｐＩ6.7)多肽丰度则显著上调。 整体上比较老化处理前后玉米种胚蛋白组的差异 胚乳蛋白质条带变化不明显 结语 玉米胚乳蛋白经过人工老化蛋白质变化不明显，这个结论和孟立波玉米萌发蛋白组学说中提到的“胚中贮藏蛋白的降解和胚乳中的贮藏蛋白的降解具有不同的变化模式,胚中的蛋白质组的变化可能早于胚乳中的蛋白质组变化”观点一致。 结语 玉米种胚的蛋白质组在人工老化前后有明显的改变:单向电泳表明 14 kD 的多肽的减少在老化 1d 时出现，而 42 kD 多肽的减少在老化无活力的种胚中出现；双向电泳在相同的 14 kD和 42 kD 处确认了差异并展示了更多的差异点，其中大部分差异点中的多肽含量明显地降低，小部分多肽消失。这与理论上 种子老化过程中因各种理化反应对蛋白质的降解作用吻合。 疑问：哪些蛋白发生了降解？ 1.膜蛋白 2.具有清除自由基的酶 实验举例：不同处理对种子老化相关的生理指标的变化 对不同处理种子分别进行了超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化物酶(POD)，过氧化氢酶、(CAT)活性和丙二醛(MDH)含量测定。结果表明，随老化时间的加长，种子保护酶系统中的超氧化物歧化酶，过氧化物酶和过氧化氢酶活性呈减弱的趋势。而对老化的种子用硫脲处理，使其活力回升后，再进行上述酶的测定，发现这些酶的含量也上升。 参考文献 [1] 印大中.衰老奥秘研究最新进展:自由基氧化-非酶糖基化衰老学说[Ｊ].现代中西医结合杂志,2005,14(1):7-10. [2] 王继红,陈绍宁,白冰,汤继华,王伟.??人工老化对玉米种子蛋白质组的影响[J].?河南农业大学学报.?2009(03) Thank you！