第7章_体液蛋白质检验学案.ppt

二、血浆蛋白质测定方法及评价 化学法凯氏定氮法（参考方法） 是测定蛋白质的经典方法，1883 年Kjeldahl首创，精密度准确度 高，但操作复杂、费时、技术性 强，不适合临床常规检测，一般 用于标准血清的标定和校正。 实验目的 熟悉血清蛋白的测定方法（双缩脲法） 掌握血清总蛋白测定的临床意义 进一步巩固掌握721型分光光度计的使用 实验原理 蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性溶液中能与Cu2+作用而产生紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反映！ 凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基（- CONH2-）均可呈双缩脲反映。 实验操作 取3支试管，按下表操作 混匀，37℃水浴放置10分钟，以空白管调零点，在540nm波长 处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算 测定管吸光度 血清总蛋白（g/L）=---------------------*蛋白质标准液浓度（g/L） 标准管吸光度 标准曲线 1.配制20g/L蛋白标准液 2.取试管6支，标记后，按下表操作 血清蛋白质标准曲线绘制操作步骤 注意事项： 1.血清标本以新鲜为宜，含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后