杆菌肽锌预混剂质量标准.docVIP

杆菌肽锌预混剂 Ganjuntaixin Yuhunji Bacitracin Zinc Premix 本品为杆菌肽发酵液与锌盐反应后的喷雾干燥物与碳酸钙等辅料配制而成。含杆菌肽锌按杆菌肽计，应为标示量的90.0%~110% 【鉴别】 ⑴ 取本品约0.4g ,加磷酸盐缓冲液（PH6.0）—吡啶—5 mol/L盐酸溶液（31∶9∶20）的混合液10ml，充分搅拌15分钟，滤过，取滤液，加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶0.5ml，加水1ml，置水浴中加热5分钟，即显深紫色。 ⑵ 在组分与相关肽项下记录的色谱图中，供试品溶液杆菌肽B1、B2、B3和A峰的保留时间应与杆菌肽锌标准品溶液相应四个峰的保留时间一致。 【检查】 粒度 本品应全部通过二号筛。 组分与相关肽 取本品适量（约相当于6000杆菌肽单位），置50ml量瓶中，加4%乙二胺四乙酸二钠溶液（用氢氧化钠试液调节pH值至7.0）稀释至刻度，磁力搅拌30分钟，离心5分钟，取上清液滤过，取续滤液作为供试品溶液，取杆菌肽锌标准品适量，用上述4%乙二胺四乙酸二钠溶液溶解并稀释制成每1ml中约含120杆菌肽单位的溶液，作为鉴别用标准品溶液。照高效液相色谱法（附录36页）测定，柱长为4.6×250mm，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径为5μm；以甲醇-水-磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钾3.48克，加水100ml使溶解，用2.72%磷酸二氢钾溶液调节pH值至6.0）-乙腈（26∶12∶4∶2）为流动相；柱温度为30℃；检测波长为254nm；流速为每分钟1ml。峰谷比Hp/Hv应≥1.2（Hp为基线以上到杆菌肽B1峰顶的高度，Hv为基线以上到杆菌肽B1和B2峰之间的曲线最低点的高度）。精密量取供试品溶液与标准品溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图至杆菌肽A峰保留时间的3倍（以杆菌肽A的保留时间15分钟～20分钟为宜；如有必要，可保持甲醇和乙腈比例不变，调整流动相中水与磷酸盐缓冲液的比例）。出峰顺序依次为杆菌肽C1、C2、C3、B1、B2、B3、A和F，相对保留时间分别约为0.5、0.6、0.6、0.7、0.7、0.8、1、2.4。按下式分别计算，杆菌肽A应不小于35.0%，杆菌肽（A＋B1＋B2＋B3）应不小于70.0%,杆菌肽（C1＋C2＋C3）应不大于20.0%,杆菌肽F应不大于13.0%。 杆菌肽（C1＋C2＋C3）含量% 杆菌肽（A+B1+B2+B3）含量% 杆菌肽A含量% 杆菌肽F含量% 式中 r总面积为供试品溶液色谱图中杆菌肽C1、C2、C3、B1、B2、A和F峰面积之和； rA+rB1+rB2+rB3为供试品溶液色谱图中杆菌肽A、B1、B2和B3峰面积之和； rA为供试品溶液色谱图中杆菌肽A峰面积； rF为供试品溶液色谱图中杆菌肽F峰面积。 锌盐 锌对照品溶液的制备 精密量取锌对照品溶液适量（精密称取氧化锌3.11g，置250ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液80ml使溶解并用水稀释至刻度，摇匀，每1ml中含锌（Zn）10mg），用0.001mol/L盐酸溶液分别定量稀释制成每1ml含0.25μg、0.5μg和1.0μg的锌（Zn）溶液，作为对照品溶液。 供试品溶液的制备 取本品约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，静置；精密量取上清液1ml置100ml量瓶中，用0.001mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 测定法 分别精密量取上述对照品溶液与供试品溶液，照原子吸收分光光度法（附录29页第一法），分别注入火焰原子化器，在213.8nm波长处测定，计算，即得。 锌含量应为2.0%～6.0%（100g∶10g（40万单位）规格）或4.0%～8.0%（100g∶15g（60万单位）规格）。 干燥失重 取本品，在105℃干燥4小时，减失重量不得超过7.0%（附录78页）。 重金属 取本品1.0g，依法检查（附录75页第二法）检查，含重金属不得过百万分之二十。 砷盐 取本品1.0g，加氢氧化钙1g混合，加水少量，搅拌均匀，先用小火灼烧使炭化，再置500-600℃炽灼至使完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水23ml 使溶解，依法检查（附录76页第一法），应符合规定（0.0002%）。 其它 应符合预混剂项下有关的各项规定（附录14页）。 【含量测定】 精密称取本品适量，加磷酸盐缓冲液（pH 6.0）-吡啶-5mol/L盐酸溶液（31∶9∶20）的混合液（pH 2.0）适量（约200杆菌肽单位加1ml），加5mol/L盐酸溶液适量使pH值至2.0，充分振摇，加灭菌磷酸盐缓冲液（pH 6.0）使成每1ml中约含100单位的悬液，3000转/分钟离心10分钟，