第八章生物检定.pptVIP

五.免疫抗散法 免疫抗散法指抗原与抗体在琼脂糖凝胶中自由抗散而相遇，形成抗原抗体复合物，这种复合物能够不断聚集产生带状或线状的沉淀带，这种沉淀带能够阻止免疫学性质与其相似的抗原抗体分子通过，允许性质不相似的分子通过，这样抗原实现分离和鉴定。 单向免疫抗散和双向免疫抗散 （一）单向免疫抗散 原理：将待检抗原滴加在含相应抗体的琼脂板小孔中，经过一定时间抗散后，形成乳白色的沉淀环，在一定的浓度范围内，抗原的含量与沉淀环直径成正比。 基本操作过程： 双向免疫抗散法 原理：把可溶性抗原和已知的可溶性抗体分别加入相邻的琼脂糖凝胶板的小孔内，在电解质存在下，让它们相互向对方抗散，当两者在最适比例相遇时，形成一条清晰的沉淀线，根据最大稀释度与已知标准品的最大稀释度之比，再计算出抗原的含量。 基本操作过程： 预复琼脂玻板的制备 凝胶板的制备 免疫抗散及结果分析 标本的保存 第八章 生物检定法 第一节 概述 定义：利用药物对生物体的作用以测定其效价或生物活性的方法。 它以药物的药理作用为基础，生物统计为工具，应用特定的实验设计，通过供试品与标准品在一定条件下比较产生特定生物反应的剂量比例，计算出供试品的效价，属于对比检定。 一.在药物分析中的应用： 药物的效价测定 微量生理活性物质的测定 重要质量的控制 某些有害杂质的限度检查 标准品与对照品的区别 标准品与对照品均指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质。 标准品是按效价单位计，以国际标准品进行标定，标准品的标示量是按生物活性来计算，不是按纯度来标示，对单组份和多组分物质比较适用。 对照品的标示量必定是某单一组分的纯度指标。 三 生物反应的类型及其量效关系 质反应与量反应 质反应：当一定剂量的药物注入动物体内后，观察某一反应或反应的某以特定程度出现与否，只有出现与不出现两种情况，不能用量来衡量，这类反应称为质反应。 量反应：药物对生物体所引起的反应随着药物剂量的增加产生的量变可以测量者称为量反应。 对比检定：将供试品与已知效价的标准品进行效力对比，根据反应的程度，求供试品的效力相当于标准品效力的倍数，从而求出供试品的效价。 对比检定 当标准品的剂量dS和供试品的剂量dT所产生的反应程度相等时， dS 、dT为标准品和供试品的等反应剂量。 dS中所含的单位dS.PS和dT中所含的单位dT.PT相等。 dS.PS= dT.PT 以供试品和标准品各自的对数剂量跟反应程度（反应函数）作图 ，T与S的两条直线应该平行。 实验误差：用可信限（FL）来表示 一般用概率水平P=0.95时 可信限低限（M-t.SM) 可信限高限（M+t.SM) 第二节 生物检定法的实验设计和统计分析 等反应剂量的测定：在生物检定中，对照品与供试品的等反应剂量大多数不是通过试验得到的，而是根据药物作用的特性，反应指标的性质，剂量与反应的关系以及生物差异的规律等，应用生物统计的原理设计各种类型的检定方法，从检定结果的资料中计算出来的。 一 质反应的直接测定法 直接测定法：是直接测得药物对各个动物最小效量或最小致死量的方法。 1.效价的计算 2. 误差项及可信限的计算 二 量反应的平行线测定法 （一）平行线测定的实验设计类型 随机设计：剂量组内不加因级限制，，有关因子的各级随机分配到各剂量组。 随机区组设计：将实验动物或实验对象分成区组，在剂量组内加以区组间的因级限制。 交叉设计： （二） 效价及可信限计算 1.将反应值或规定的函数按剂量分组列成方陈表 2. 特异反应剔除和缺项补足 3. 方差分析和可靠性测验 4. 进行效价和可信度计算 * 效价比值 供试品效价 PT=P×供试品的估计效价或标示量 当供试品按标示量或估计效价进行实验时 当两批以上的供试品(T, U,…)和标准品同时比较时 *