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2017-06-07 发布于重庆
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随机pcr原理

2.3.4 随机PCR及测序 2.3.4.1 随机PCR原理利用随机PCR确定插入的转座子的具体位置 Das et al., 2005 。本实验中的随机PCR是指用包含10个随机寡核苷酸的随机引物ARB1和根据转座子上的一段基因序列设计的引物P7-1进行第一次PCR，然后以其产物作为模板，以随机引物上的一段序列P7-2和根据转座子上另一段基因序列设计的引物ARB2进行第二次PCR。具体原理见图6 图 6 随机PCR原理图P7-1、P7-2都是以转座子上一段序列设计的引物，P7-2位于 P7-1下游ARB1为包含ARB2序列的随机引物。 DNA作为模板，以P7-1和ARB1为引物进行第一次PCR，第一次反应程序为： 95℃ 5min 95℃ 30s 6× 30℃ 30s 72℃ 2min 95℃ 30s 30× 45℃ 45s 72℃ 2min 72℃ 4min 然后以第一次PCR产物作为模板，以P7-2和ARB2为引物进行第二次PCR。第二次反应程序为： 95℃ 1min 95℃ 30s 30× 52℃ 30s 72℃ 2min 72℃ 4min 纯化后的PCR终产物以P7-2为引物进行测序，引物序列见表2。引物合成及测序委托北京博尚生物技术有限公司表 2 随机PCR所用的引物 GGCCACGCGTCGACTAGTACNNNNNNNNNNGATAT ARB2 GGCCACGCGTCGACTAGTAC P7-1 CTA ACA ATT CGT TCA AGC CG P7-2 GGA TGC GTC TAA AAG CCT GC P7-1 第一次PCR 染色体DNA 转座子 ARB1 第二次PCR P7-2 ARB2 ARB2 ARB1