三、细胞凋亡与肿瘤.pptVIP

细胞凋亡与肿瘤 胡新荣 第一节 细胞凋亡的概念和生物学意义 第二节 细胞凋亡的形态特征，光镜下 电镜下 细胞凋亡与坏死的区别 凋亡 坏死 第三节 细胞凋亡发生的酶学变化 第四节 细胞凋亡发生过程中活性氧、钙超载、线粒体损伤的作用一、活性氧 二、钙超载 三、线粒体损伤 第五节 凋亡发生的范围及诱导与抑制因素 一、诱导凋亡的因素： 二、抑制细胞凋亡的因素 第六节 细胞凋亡的信号转导 细胞凋亡信号转导系统的特点 第七节 细胞凋亡的基因调控 一、P53基因 二、Fas基因 三、c-myc基因 四、TGF-b1 五、 bcl-2基因 六、pRb 第七节 细胞凋亡与肿瘤一、凋亡与肿瘤发生发展及转移 二、细胞凋亡与肿瘤的防治 防治举例 第八节 细胞凋亡的检测方法 一、形态学观察方法（一） 形态学（二） 二、DNA凝胶电泳 三、酶联免疫吸附法（ELISA）核小体测定 四、流式细胞仪定量分析 1、Hoechs-PI双染色法 2、DNA片段原位标记法 3、检测细胞膜成分变化的Annexin V联合PI法 V-PI 0、目前治疗肿瘤新设想—诱导凋亡 0、凋亡与其他疾病一、细胞凋亡异常增加见于相关疾病 二、细胞凋亡过度减少相关疾病 原理：凋亡细胞膜通透性介于正常细胞和坏死细胞之间 特点： ⑴检测细胞数量大，较准确 ⑵可作许多相关分析 ⑶可确定凋亡细胞所处细胞周期 32 正常细胞不着色，荧光很浅 凋亡细胞主要摄取Hoechs，强蓝色荧光 坏死细胞主要摄取PI（碘化丙啶）红色 33 原理：荧光素、地高辛或生物素标记的DUTP和TdT与凋亡细胞DNA链裂解后3`羟基端结合 原位缺口转移：用DNA多聚酶将标记物接到DNA断端 原位缺口末端标记技术：用TdT将标记的DUTP接到DNA断端 34 原理：细胞凋亡早期细胞膜内侧磷脂酰丝氨酸(PS)迁移至细胞膜外侧；磷脂结合蛋白V(Annexin)同其有高度结合能力,可作为探针 35 结果判断： ⑴正常细胞 V、PI 均 低染 ⑵凋亡细胞 V高染，PI低染 ⑶坏死细胞 V、PI 均高染 应用价值 ⑴凋亡早期；灵敏，假阳性低；简单省时；结果可靠，是目前最为合理的方法 36 导入野生型p53抑制肿瘤增生；下调突变型p53、bcl-2的活性与表达，减弱其对细胞凋亡的抑制；抑癌基因引入瘤细胞，降低致瘤性，使肿瘤逆转为正常细胞；引入某些细胞因子，抑制肿瘤恶性表型，使细胞丧失致瘤性；应用点突变技术，使异常表达基因失活或修复突变基因；导入药物敏感基因，有助于细胞凋亡 38 神经系统退行性病变 骨髓发育不良综合征 缺血性损伤 心梗、肾小球肾炎 肝病变 病毒性和酒精性肝炎 AIDS 39 * 肿瘤学 300-500例/10万 1 2 概念：是有基因控制的个别细胞发生的主动有序的死亡过程，具有特征性的形态和生化改变。分生理和病理性凋亡。 生物学意义：选择性地清除多余、无用、有害细胞、衰老细胞 3 凋亡细胞、凋亡小体散在分布。 凋亡细胞：体积缩小，胞浆红染，胞核皱 缩 ，染色质浓块状。 凋亡小体：球形或椭圆形，红染，为膜包 裹胞质或核碎片。 4 细胞表面连接结构消失，光滑轮廓 细胞皱缩，胞质中细胞器集中；胞膜出芽或气泡；细胞器保持完整性 核改变：核质固缩坚实；边集；核膜皱折 5 区别点 细胞凋亡 坏死 原因 生理/病理性 病理性 形态特征： 分布 单个散在 片状 胞膜 完整 不完整 细体 变小 肿胀 核质 浓缩，核膜下 分散絮状 胞器 完整 肿胀破碎 凋亡小体 有 无 6 周围炎症 无 有 生化特征： 调节 基因调节，主动 无，被动 DNA降解 有规则，早期 不规则， 200bp片段， DNA大片段 梯状特征电泳 涂状电泳 蛋白合成 有 无 7 核酸内切酶：在核小体连接区