第四章人工染色体载体课件.pptVIP

第四章 人工染色体载体 artificial chromosome vector 一、黏粒(cosmid)的结构特征和用途 1.黏粒实际是质粒(plasmid)的衍生物，带有将DNA包装到?噬菌体颗粒中所需的DNA序列(cos序列) 2.组成：质粒复制起点(replication origin)（colE1）、抗性标记ampr和cos位点，能象质粒一样转化(transform)和增殖(multiplication) 3.大小：一般5 kb左右，可克隆38～47 kb片段 包括?噬菌体（38～52 kb） 第一节 黏粒载体 N=ln(1-p)/ln(1-f) P: 文库中出现阳性克隆的期望值 F: 插入片段占总DNA的比值 哺乳动物 3x109 17 kb 99% N=ln(1-0.99)/ln(1-(1.7x104/3x109)=8.1x105 如果 克隆片段平均大小为40 kb N=ln(1-0.99)/ln(1-(4.0x104/3x109)=3.45x105 用途： 1.在构建基因文库(gene library)中，减少文库中重组体的数目 2.在单个重组体中克隆和增殖完整的（较大的）真核 基因。 如鸡前?2胶原、鼠三氢叶酸还原酶（DHFR）的基因至少为40kb，要克隆这些片断，需利用黏粒载体。质粒载体虽可携带大片段，但转化率低。 3.克