生物：专题5.3《血红蛋白的提取和分离》(新人教选修1)08探索.ppt

透析过程动画演示 利用透析袋透析 3.纯化 实现途径： 4.纯度鉴定 (1)方法： （2）原理： 凝胶色谱法 电泳（常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳） 通过电泳区带位置的比对，确定蛋白质的纯度或相对分子质量。即选用一组已知浓度的标准蛋白（或相对分子质量）的标准蛋白质与需要鉴定的蛋白质同时进行电泳，通过比对二者电泳的区带位置，确定需要的鉴定的蛋白质的纯度（或相对分子质量） 蛋白质的提取和分离 （三）凝胶色谱制作 1.凝胶色谱柱的制作 　　①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。 ②底塞的制作： 　　打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。 　　 ③顶塞的制作： ④组装： ⑤安装其他附属结构。 打孔→安装玻璃管 　　底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。 注 意 2.凝胶色谱柱填料的处理 计算凝胶量 配置凝胶悬浮液 装填 洗涤平衡 　　凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意 　　缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意 装配好的凝胶柱