Bmi1分子在外阴鳞癌组织中表达及对人表皮鳞癌细胞系A431生物学行为影响.pdfVIP

目录 中文论著摘要????????????????????????1 英文论著摘要????????????????????????4 英文缩略语?????????????????????????7 前言???????????????????????????8日U舌??????????? 第一部分Bmi．1蛋白在外阴鳞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系 材料和方法D Q·O QI O???????????????????10 结果 ??????????????????????????12 讨论????????????????0 0?????????12 附图表???????????????????????????14 第二部分siRNA介导的Bmi．1基因沉默对人表皮鳞癌细胞系A．43 l生物学行为 的影响 材料和方法???????0 a??????????g OI O?16 结果 ??????????????????????????28 讨论???????????????????????????29 附图表??????????????????????????31 参考文献I QI O O????????Q OI QI OI D???????35 综述???????????????????????????38 致谢O OI m????O QI Q????l O???44 个人简介????????????????????O OI??45 万方数据 ·中文论著摘要· Bmi-1分子在外阴鳞癌组织中的表达及对入表皮鳞 癌细胞系A-43 1生物学行为的影响 目的 外阴癌在女性生殖道恶性肿瘤中占4％，常见于60岁以上的妇女，鳞状细 胞癌是其主要的病理类型，占90％。近年来，其发病率呈上升趋势，而且，年 轻患者的比例也有所增加。外阴癌绝大多数生长在外阴皮肤表面，容易被发现， 但由于其部位的特殊性，以及一些早期的症状，如：外阴瘙痒、疼痛、小的赘生 物等，很多患者未予重视，或者是患者就医时医生未能识别，而未行病变部位的 活检组织检查，当成普通的炎症治疗，从而延误了病情。但随着医疗水平的不断 提高以及医生经验的日益积累，外阴癌的早期诊断率也随之提高。外阴鳞癌的发 生、发展是一个多因素、多基因、多步骤的复杂过程，其中癌基因的过度表达或 抑癌基因的灭活与突变是细胞发生癌变的分子基础。探讨外阴鳞癌的病因及发病 机理为临床上早期诊断及治疗开辟新思路，具有十分重要的意义。 B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B cell．specific MLVintegrationsite．1，Bmi．11基因是于1991年由荷兰癌症中心发现的一种原癌基 因，为多疏基因(polycomb group gene)家族的重要成员。作为一种转录抑制因 子，Bmi．1能够改变染色质结构，使后者不能结合一些转录因子，从而参与中轴 骨的形成、血细胞生成、细胞周期调节和衰老。近年来研究发现，Bmi．1在多种 肿瘤中的表达呈失调状态，且参与了肿瘤的发生发展。本研究采用免疫组化检测 人外阴鳞癌组织，VIN组织及癌旁正常外阴组织中Bmi．1的表达情况，并采用小 片段RNA干扰外阴鳞癌细胞系A．431中Bmi．1的表达，分析沉默Bmi．1的表达 对外阴鳞癌细胞增殖，凋亡，及侵袭能力的影响，以探讨Bmi．1在外阴鳞癌发生 发展中的作用。 方法 采用免疫组织化学染色法检测75例外阴鳞癌组织，40例VIN组织及10例 万方数据 癌旁正常外阴组织标本中Bmil基因的表达，并分析其与外阴癌临床指标之间 的关系。根据Bmi一1基因序列，设计合成千扰Bmi．1的三条siRNA序列(siI矾A．1、 siRNA．2和siRNA．3)，分别转染A．431细胞，同时设立阴性对照组(转染阴性 对照siRNA)和空白对照组(对细胞不做任何处理)。RT-PCR及Western．blot方法 分别检测转染后A．43 1细胞中Bmi一1 mRNA及蛋白的表达，选择最佳沉默组 (siRNA．2组)，应用MTT实验、Annexin V-FITC／PI双标记实验和Transwell小 室侵袭实验分析转染后细胞的增殖、凋亡及侵袭能力的变化。 睦里暑口禾 一、Bmi．1在外阴病变组织中的表达情况 免疫组化结果提示：在癌旁正常外阴组织标本中Bmi．1基因的阳性表达率 为0，与VIN中的25．0％相比差异有显著性(P0．05)。在VSCC中Bmi．1 基因的阳性表达率为68．O％，与VIN相比差异也有显著性(P0．05)。且 Bmi．1在VSCC中的高表达，与患者的年龄、病理分期、淋巴结转移及分化程 度之间无明显相关(P0．05)。 二、特异性的siRNA对人表皮鳞癌细胞系A．43 l生物学行为的影响 把Bmi．1 siRNA