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发酵工业中噬菌体的防治
噬菌体简介
染菌后(噬菌体,下同)症状
染菌的原因
应急的挽救措施
噬菌体的预防
抗噬菌体菌株的选育
噬菌体
噬菌体是原核生物病毒。非常微小,其直径为0.1μm;不具有完整细胞结构;只含有单一核酸。它的感染能力非常强,极易感染用于发酵的细菌和放线菌。传播蔓延的速度非常快,且很难防治,对发酵产生有巨大的威胁。它可以通过环境污染、设备的渗漏或死角、空气系统、培养基灭菌过程、补料、取样及其他操作过程进入到发酵系统中。
噬菌体在侵染宿主细胞时,首先是吸附在宿主细胞表面,然后将核酸注入到细胞内部,衣壳则留在外面。核酸进入宿主细胞以后,就利用宿主细胞内的物质,复制出子代噬菌体的核酸,并合成构成子代噬菌体衣壳的蛋白质。在细胞的一定部位,这些蛋白质和核酸装配成子一代噬菌体。装配完成的噬菌体,在细胞裂解以后,一齐被释放出来,释放量通常在102~103个左右。
还有一种温和噬菌体,进入宿主细胞后其基因组能与宿主菌基因组整合,并随细菌分裂传至子代细菌的基因组中,不引起细菌裂解。整合在细菌基因组中的噬菌体基因组称为前噬菌体,带有前噬菌体基因组的细菌称为溶原性细菌。
前噬菌体偶尔可自发地或在某些理化和生物因素的诱导下脱离宿主菌基因组而进入溶菌周期,产生成熟噬菌体,导致细菌裂解。温和噬菌体的这种产生成熟噬菌体和溶解宿主菌的潜在能力,称为溶原性。
温和噬菌体可有三种存在状态:
①游离的具有感染性的噬菌体;
②宿主菌胞质内类似质粒形式的噬菌体核酸;
③前噬菌体。
发酵工业中所涉及的噬菌体主要属于细菌和放线菌噬菌体。细菌噬菌体所涉及的发酵工业较多,如氨基酸、酶制剂、以及酸乳制品等生产 而放线菌嗟菌体主要出现在抗生索发酵工业中。
菌体感染了噬菌体导致发酵不正常进行,甚至倒灌。其主要症状有:
菌体生长受到影响,发酵液(OD值)光密度不上升或回降
pH逐渐上升
氨利用停止
糖耗、温升缓慢或停止
产生大量泡沫,是发酵液呈黏胶状
镜检时菌体数量显著减少,甚至找不到完整的菌体
发酵周期延长、产物生成量减少或停止
染菌症状
环境污染噬菌体是造成噬菌体感染的主要根源。
设备渗漏或死角,管道的弯曲和焊接处灭菌不彻底。
在发酵工程中操作不当使得噬菌体进入发酵系统。
染菌的原因
上海味精厂噬菌体污染因素的分析
在发酵生产中发现了噬菌体污染时,首先必须取样检查,并根据各种异常现象作出正确判断,及可能快采取相应的挽救措施。常用的应急方法有一下几种:
(1) 加入螯合剂如草酸及柠檬酸或抗生素(适用于耐药的生产菌)
(2)适量补入新鲜的发酵培养基或生长因子(玉米浆、酵母膏)
(3)大量补接种子液或重新接种抗性菌种培养液,以便继续发酵至终点,以防止倒灌。在补种之前也可对已感染了噬菌体的发酵液低温灭菌。
应急的挽救措施
例:谷氨酸发酵中期污染噬菌体的挽救措施
(沈阳味精厂)
谷氨酸发酵时若中期染噬菌体,如果返消,则得不偿失;如果实罐灭菌重新接种,虽然杀死了噬菌体,但是,发酵液pH很高,既使用酸中和下来,也会由于盐类物质积累过多,造成菌体不适,不利发酵。另一方面由于实消后,接进去的是幼龄菌种不是产酸型菌体,因此,未能使菌体增殖,底物就趋于耗尽,致使产物积累的不多。
针对上述问题,我们查阅了有关资料,结合生产实践,采取了“对流”的措施。经过多次实践,收到了较理想的效果。其做法是将发酵中期染噬菌体的罐(无杂菌)与另一正常发酵后期罐用管路接通,利用风压将二者对流混合,然后继续发酵。
1.噬菌体吸附寄主细胞的能力不是均匀的。
细菌同其它生物一样,对外来“异物”具有一定的抵抗能力。当然,这种能力随菌龄不同.就谷氨酸发酵菌株而言一般认为,幼龄细胞抵抗能力较弱,壮龄、老龄细胞抵抗能力较强。“对流”的实践正是在这种观点的启发下进行的。
2. “对流”起到的交换作用
“对流”可以使染菌罐内相对过剩的营养物质(葡萄糖、生物素、无机盐等)补充到营养物趋于耗尽的正常后期内;同时将正常罐内的大量产酸型菌体补充到染菌罐内。
3.“对流”可缓解染菌罐pH过高问题
污染噬菌体,发酵液pH值升高,在对流前选择正常后期罐的同时尽量选择pH低的发酵罐,从而达到中和的目的,达到发酵所需的要求。
关于“对流”的理论根据讨论
优点:
1,不需重新灭菌或消毒过程。但必须对有关的管道进行严密的消毒,防止“对流”过程的污染。可相对节省水和蒸汽。
2.不需额外添加任何营养物质,可相对节省原料。
3.它不是发酵的重新开始,而是在原有基础上的继续。因此,所消耗的时间比任何一种处理方法都短。
4.方法简便易行,成功率高。
缺点:
采用“对流”方法的有不足之处是它扩大了污染面积,因此,必须做好后处理工作,防止噬菌体的扩散。
“对流”的优缺点
(1) 合理使用抗性菌株
选育抗性菌株的标准:
对以前出现过的噬菌体都有抗性
不是溶原
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