利用分子印迹技术从中药粗提物中定向分离胡黄连苷ⅱ的研究.docVIP

[稿件编号]：20130201001 [基金项目]：国家自然科学基金面上项目（NO. [通讯作者]：刘庆山，男，汉族，副研究员，博士，中国药科大学研究生导师，研究方向：药理学与创新药物研究。Tel:010Email: nlqsh@163.com。 [作者简介]：衣丽娜，女，汉族，中国药科大学在读硕士研究生，研究方向：药理学与创新药物研究。Tel:Email: yilina0123@163.com。 利用分子印迹技术从中药粗提物中定向分离胡黄连苷Ⅱ的研究 衣丽娜1,2，李克琴1，王秋娟2，刘庆山1,*，郭青龙2 （1. 中央民族大学中国少数民族传统医学研究院，北京 100081 2. 中国药科大学药理学研究室，江苏 南京 210009） 摘要：胡黄连苷Ⅱ为神经保护的中药活性成分，但其传统的分离工艺较复杂，效率较低，溶剂用量大，环境不友好，而分子印迹技术是一门分子识别技术，其制备的分子印迹聚合物因具有特异性结合位点而对目标分子有较高的选择吸附性，能够克服传统分离技术的以上缺点。该研究以胡黄连苷Ⅱ为模板，采用沉淀聚合法制备了胡黄连苷Ⅱ的分子印迹聚合物，并对其性能进行了研究。结果表明合成的聚合物微球不仅表面光滑，大小均匀，而且Scatchard分析得出胡黄连苷Ⅱ分子印迹聚合物的最大表观结合位点数Qmax=3.02 mol·g-1，远远高于其空白印迹聚合物。充分证明利用沉淀聚合法可以形成形貌和靶向吸附能力均较好的黄连苷Ⅱ分子印迹聚合物，可用于从中药粗提物中靶向分离胡黄连苷Ⅱ及其结构类似物，有利于减少中药提取分离过程中有机溶剂的使用，环境友好,且操作简便，为中药胡黄连苷Ⅱ的高效分离提供了新的方法。 关键词：胡黄连苷Ⅱ；分子印迹技术；沉淀聚合法 胡黄连苷Ⅱ(PicrosideⅡ)是玄参科植物胡黄连的主要成分，具有促进神经干细胞增殖的功能。目前胡黄连苷Ⅱ的提取分离通常采用溶剂提取法、水蒸汽蒸馏法和大孔树脂吸附法等传统方法，但这些方法工艺复杂、试剂消耗大、环境不友好，因此寻找新的方法从中药粗提物中快速高效地分离出胡黄连苷Ⅱ及其结构类似物具有重要的意义。分子印迹聚合物(Molecularly imprinted polymers, MIPs) 是一种对目标分子具有特异性识别和结合能力的聚合物，诺贝尔奖获得者Pauling[1]首先提出了可利用抗原作为模板来铸造抗体的空间结合位点理论，Dickey[2]首先实现了染料在硅胶中的印迹并提出“分子印迹”的概念。本文采用沉淀聚合法合成了以胡黄连苷Ⅱ为模板分子的MIPs，研究表明其对目标分子具有较高的选择吸附性，且此方法克服了传统分离方法的缺点，为中药有效成分及其类似物的提取分离提供了更加高效的方法。 1 材料 UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）， FEI Quanta 200F扫描电子显微镜（美国FEI公司），KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器系统有限公司），HH-2型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），ZYQ-211型恒温振荡器（黑龙江东拓仪器制造有限公司），DMM-90904电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。 胡黄连苷Ⅱ标准品（98%，购自江苏泽朗医药科技有限公司；α-甲基丙烯酸(MAA)，丙烯酰胺(AM)，均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；1-乙烯基咪唑(1-Vinyl)和乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)均为分析纯，购于日本东京化成工业株式会社(TCI)；偶氮二异丁腈(AIBN)化学纯，购自上海试四赫维生化有限公司；乙腈为色谱纯，甲醇、冰醋酸及其他试剂均为分析纯，均购自上海星可生化有限公司。 2 方法与结果 2.1 功能单体的选择 称取胡黄连苷Ⅱ标准品，溶于50%乙腈水溶液中，配成1.95×10-2 mmol·L-1的溶液；再称取或量取适量的功能单体 (1-Vinyl) 于容量瓶中，加入乙腈溶解，配成5.85×10-2 mmol·L-1的溶液。按照胡黄连苷Ⅱ与功能单体的摩尔比为1:1至1:6的顺序，逐次向胡黄连苷Ⅱ标准液中加入功能单体溶液，并测定其紫外光谱的变化，见图1。 图1胡黄连苷Ⅱ溶液加入功能单体1-Vinyl（左图）或AM后的紫外光谱 Fig.1. Changes in UV-spectrum of picroside Ⅱ with the addition of functional monomer 1-Vinyl（left）or AM 胡黄连苷Ⅱ溶于50%乙腈水溶液后，在200，220，260 nm处有吸收峰，但随着功能单体的加入，只有200，220 nm处的吸收峰有变化。从图1-a可以看出，随着MAA的加入，200 nm处的吸收峰没有产生移动，而2