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2.2 动物细胞工程 教学目标 了解动物细胞融合的原理、过程和意义。 理解单克隆抗体制备的过程和应用 重点难点 1.教学重点: 单克隆抗体的制备和应用 2.教学难点: 单克隆抗体的制备过程 问题探讨 教学过程 一.动物细胞融合 1.动物融合的过程 请同学们阅读课本P52动物融合 灭活病毒诱导细胞融合的原理: 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏这些病原体的抗原结构。 思考题 1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁? 7.你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗? 骨髓瘤细胞 教学反馈 1.动物细胞融合技术最重要的用途是 ( ) A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 课后习题 1. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞, 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 ( ) ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤ C.①②③④ D.②③ 3.“生物导弹”是指 ( ) A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 三.思考与探究 1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同? 2.制备单克隆抗体时,为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞? 教学参考 1.已成功的动物细胞融合实例还有哪些? 2.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合? 就目前常用的细胞融合方法来看,不管是用物理的、化学的方法,还是生物的方法,其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合,其效率太低,不一定能得到融合细胞。更重要的是,即使两个细胞已发生融合,但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道,体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上,但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,如果仅取一个脾细胞(含B淋巴细胞)和一个瘤细胞杂交,我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的;若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合,就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 3.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养? 融合后的细胞经选择性培养基培养后,能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞,通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释,用多孔细胞培养板培养,使每孔细胞不超过一个,通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体(常用酶联免疫吸附试验法),那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞,挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释,一般需进行3~4次,直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌—鸡 原生质体—血红细胞 1975年 人—胡萝卜 腹水癌细胞—原生质体 1976年 人—小鼠 纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 1978年 要知道更多的实例,需经常查阅更多科研报道。 * * 选修3 现代生物科技专题 专题2 细胞工程 教学目标 重点难点 问题探讨 教学过程 知识结构 教学反馈 课后习题 教学参考 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 “番茄—马铃薯”(理想图) 通过长期的实验,科学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄—马铃薯”植株。 如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交,得到绿色的小奶牛,那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗? 动物细胞也能融合吗? 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病
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