第五低压液相层析(色谱)技术导论.ppt

保持柱上端胶面平整、柱内无气泡和胶床不干裂十分重要。 为此，除加样时注意不破坏胶面平整外，在整个层析过程中，应在胶面上端保留合适体积的洗脱液(约1-2 cm柱高)，避免洗脱液滴入柱内时，破坏胶面的平整或可能造成胶床干裂。 2.不需要让柱流干至床表面，而是加入1％浓度的蔗糖来增加样品的密度； 3. 用一个毛细管和一个注射器或蠕动泵把样品直接传送到柱表面(如一些商品柱附有专门加样装置)。 洗脱 用适当的洗脱液把各组分依次从柱上洗脱下来。 使用洗脱法溶剂与柱的相互作用比溶质与柱的相互作用弱，溶剂越过结合的分子，逐渐地将它们从柱上冲洗下来。 在冲洗过程中各组分因为吸附力不同而逐渐分离。 五、洗脱 六、流速及控制 洗脱液流速也往往影响层析的分辨率 在整个分离过程中，洗脱液通过柱时保持稳定的流速是十分重要的。 与流速有关的因素 所用介质的结构、粗细及数量； 层析柱大小，介质填装的松紧; 洗脱液的粘度、操作压等. 必须根据具体条件反复试验以确定一个合适的流速。 太高的流速使洗脱峰加宽，继而降低了分辨率； 过高时，有时会使流速先快后慢甚至发生阻塞。 流速可以通过调节“操作压”来控制，“操作压”相当于在柱上部的贮液瓶中溶剂的水平和柱出水口位置的水平之差。 获得稳定流速的另一方法是利用蠕动泵把洗脱液泵入或泵出柱，并保持稳定流速。 七、分部收集 洗脱液必须分成小部分收集，每一部分