叶绿体提取液对肿瘤细胞的抑制作用概述.docxVIP

高中组11年级集体项目（2人）探究叶绿体提取物对肿瘤细胞的抑制作用组别：高中组学科：生物化学探究叶绿体提取物对肿瘤细胞的抑制作用摘要：绿色蔬菜是人类的主要食物，在日常膳食中可通过绿叶蔬菜的摄入,可以达到维持机体代谢、增强体质, 甚至防病抗癌的作用。绿色植物的显著特点在于绿色，其绿色的产生源于细胞内的叶绿素。早期研究发现:叶绿素具有造血、解毒、抗病等多种用途。叶绿素是否具有抑制癌症的作用，尤其是对于消化道肿瘤的抑制作用，尚未有详尽的报道。本研究我们选取菠菜作为叶菜类的蔬菜代表，黄瓜作为瓜菜类的代表，通过提取这两种蔬菜叶绿体中的叶绿素和类胡萝卜素，观察了它们对人胃癌细胞生长的影响。我们用乙醇提取法提取市售菠菜和黄瓜中的叶绿素和类胡萝卜素，倍比稀释成 5个浓度，（1：1；1：2；1：4；1：8;1:16）用MTT法观察它们对人胃癌细胞BCG823生长的影响。结果显示：菠菜中叶绿素a浓度为6.345（mg/L），叶绿素b浓度2.425（mg/L），类胡萝卜素浓度为1.595（mg/L）。黄瓜中叶绿素浓度为2.359（mg/L），叶绿素b浓度为0.644（mg/L），类胡萝卜素的浓度为0.565（mg/L）。5个浓度（1：1；1：2；1：4；1：8;1:16）的菠菜提取液对人胃癌细胞的抑制率分别为81%、80%、79%、77%、34%；而黄瓜抑制率分别为68%、63%、58%、46%、26%。本次试验结果显示：由于菠菜中的叶绿素含量和类胡萝卜素的含量均高于黄瓜，所以其对细胞生长的抑制效果强于黄瓜，提示由于叶菜类的蔬菜叶绿素和类胡萝卜素的含量高于瓜菜类，所以我们在日常膳食中应该多摄入叶菜类的蔬菜以增加叶绿素、类胡萝卜素的摄入量从而达到更好的抗癌抗病作用。关键词：叶绿素；人胃癌细胞；MTT；细胞抑制率引言绿色蔬菜是人类的主要食物，在日常膳食中可通过绿叶蔬菜的摄入,可以达到维持机体代谢、增强体质, 甚至防病抗癌的作用。绿色植物的显著特点在于绿色，其绿色的产生源于细胞内的叶绿素。那么叶绿素是否具有防癌抗癌的作用呢？叶绿素存在于植物细胞内的叶绿体中。大部分高等植物和藻类微生物的叶绿体是植物光合作用的场所。主要含有叶绿素（叶绿素a和叶绿素b）、类胡萝卜素（胡萝卜素和叶黄素），叶绿素a和叶绿素b主要吸收蓝紫光和红光，胡萝卜素和叶黄素主要吸收蓝紫光。这些色素吸收的光都可用于光合作用。叶绿素的含量最多，遮蔽了其他颜色，而且，叶绿素吸收绿光最少，绿光被反射，所以呈现绿色。主要功能是进行光合作用。早期研究发现:叶绿素具有造血、解毒、抗病等多种用途。叶绿素是否具有抑制癌症的作用，尤其是对于消化道肿瘤的抑制作用，尚未有详尽的报道。二、方法论与假设概述2.1叶绿素和类胡萝卜素提取取市售的菠菜叶片或黄瓜表皮2克，放于坩埚加入酒精研磨至褪色。静置10分钟后过滤并用酒精定容至15ml。存放于塑料试剂瓶中并用锡箔纸包裹放入冰箱冷藏备用。取 1200ul（95%乙醇）+50 ul（叶绿素提取物）用722分光光度计分别在波长A665, A649, A470测定吸光值，按公式分别计算菠菜和黄瓜提取物中叶绿素浓度以及菠菜和黄瓜中叶绿素的含量。实验时每种叶绿素样品置于离心管中1500rpm离心5min取上层清液1ml，按1: 1，1:2，1:4，1:8，1:16用PBS稀释成5个梯度。叶绿素浓度计算公式如下：叶绿素含量计算公式如下：2.2细胞培养人胃癌细胞BCG823采用DMEM培养液含10%小牛血清，100mg/ml青霉素，100mg/ml的链霉素，100mg/ml的庆大霉素，在37℃，5%的CO2孵箱中培养。2.3细胞毒性检测（MTT实验）取对数生长期的细胞，取96孔板，每孔加入细胞悬液100μl（细胞数2.0104），实验组分别加入5个梯度的菠菜和黄瓜的叶绿素抽提液100μl，对照组加100μlPBS，培养2小时后，小心吸取上面的培养液，加MTT（终浓度1mg/ml），37%培养箱中培养4小时，弃上清液，每孔加入二甲亚砜(DMSO)100ml,震荡摇匀，在酶标仪上以波长540nm测定各孔的吸光度值，按公式计算细胞生长抑制率。细胞抑制率计算公式抑制率（%）=1-实验组OD值100%对照组OD值 2.4实验流程图：叶绿素和类胡萝卜素提取测定原料称量取样在乙醇溶液中剪碎研磨过滤722分光光度计测定叶绿素浓度2. 细胞毒性检测(MTT实验)细胞培养箱图胃癌细胞在培养瓶中生长图胃癌细胞（200）图96孔板MTT实验结果图酶标仪测定吸光度值图三、数据记录与分析3.1 菠菜和黄瓜叶绿素和和类胡萝卜素含量表1菠菜和黄瓜提取液吸光度值A665A649A470菠菜0.6860.2690.687黄瓜0.2120.0880.219表1显示菠菜和黄瓜提取物经722分光光度计分别在波长A665,