DNA测定.docVIP

一、光密度测定法 ?[原理] ? DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD260，再推算出其浓度。 ??? [仪器] ??? 分光光度计(紫外可见光两用)。 ??? [试剂] ??? 水，DNA或RNA溶液。 ??? [操作] ??? (1)取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。 ??? (2)用lml水做空白。 ??? (3)把样品杯放在分光光度计比色槽上。 ??? (4)每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在260nm处OD值为0.2，则原DNA或RNA样品浓度为2ug／ul。 ??? (5)如果想要检测样品的纯度，那么还要再测一次280nm处OD值，计算二者的比率，若比率接近2，则说明样品中核酸比较纯。若比率小于1.6，则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中，建议再用酚／氯仿抽提继以乙醇沉淀以除去杂质。 ??? (6)如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质，那么还要测定一次230nm处OD值。紫外吸收法测定DNA含量 ??组成核酸分子的碱基，均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收值在波长为250~270nm之间。核酸的最大吸收波长是260nm，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。在波长260nm紫外线下，1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml；单链DNA或RNA为20μg/ml。可