体外分析-核医学-2016.ppt

第六章 体外分析 分 类： 第一节 放射免疫分析 Radioimmunoassay, RIA 四. RIA质量控制 1 零标准管结合率（B0%） 30%-50% 2 非特异性结合率（NSB%）5%-10% 3 室内质控图 制作及质控规则 问题： 放射免疫分析反应物有几种 ？ 放射免疫分析抗原通常用什么标记? 免疫放射分析反应物有几种？ 思考题： 1. 简述放射免疫分析的基本原理及方法。 2. 如何利用RIA方法检测待测物？ 3. 简述免疫放射分析的基本原理及方法。 4. 放射免疫与免疫放射分析有何区别？ 参考书： 1.核医学，第七版，李少林等主编，人卫出版社; 2.核医学，谭天秩主编； 3.医学免疫学，第五版，金伯泉主编，人卫出版社 第二节 免疫放射分析 Immunoradiometric assay, IRMA 一. IRMA基本原理* （一）非竞争性免疫结合反应： 体外条件下 过量的放射性标记抗体（*Ab）与非标记抗原（Ag）进行非竞争性免疫结合反应 （二种试剂 ） *Ab + Ag-*Ab + *Ab Ag （B） （F） （二） 剂量反应曲线/标准曲线： 定量基础： Ag- * Ab的量（因变量）与Ag的量（自变量）之间存在正相关的函数关系 用标准结合曲线（简称标准曲线）替代 一. IRMA基本原理* 标准曲线的制备 一. IRMA基本原理* IRMA标准曲线的制备 一. IRMA基本原理* RIA标准曲线的制备 B% 标准曲线 一. IRMA基本原理* B% B% IRMA的标准曲线 RIA的标准曲线 一. IRMA基本原理* 二. IRMA常用方法 双抗夹心法 (double antibody sandwich method) 2.标记第三抗体法(labeled third antibody method) 3.双标记抗体法(double labeled antibody method) 优点： l?? 反应动力学：非竞争性 且抗体过量 容易达到平衡 温度变化对结果影响不大。? l?? 灵敏度：比RIA高出10～100倍。 l?? 加样误差少：加样误差主要来自抗原一个环节 缺点： l??需要特殊的分离方法。? l??对半抗原不适应 l??要大量的*Ab，昂贵 三. IRMA优缺点 四. IRMA与RIA主要区别* 低剂量区无不确定因素 低剂量区有不确定因素 反应到达平衡快 反应到达平衡慢 Ag*Ab的量与待测Ag的量呈正相关 *AgAb的量与待测Ag的量呈负相关 所用抗体是过量的 所用抗体是限量的 二种主要反应试剂 三种主要反应试剂 采用标记抗体 采用标记抗原 非竞争性抗原抗体结合反应 竞争性抗原抗体结合反应 IRMA RIA 第三节 非放射免疫分析技术 1 酶标记免疫分析技术 2 化学发光免疫分析技术 3 时间分辨荧光免疫分析技术 4 胶体金标记分析技术 一 酶标记免疫分析技术（enzyme immumoassay,EIA) 酶分子代替放射性核素 标记抗原或抗体的免疫分析的技术 结合了抗原抗体高特异性和酶促反应的高敏感性。常见方法为ELISA。 常用的酶为辣根过氧化物酶 底物是四甲基联苯胺 (TMB) ，反应后显黄色。 二 化学发光免疫分析技术(CLIA) 以化学发光物质代替放射性核素作为示踪物的超微量分析技术。 1 化学发光免疫分析 吖啶酯 2 化学发光酶免疫分析 金刚烷 3 电化学发光免疫测定 三联吡啶钌 三 时间分辨荧光免疫分析技术（time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA） 采用稀土元素标记抗体，利用时间分辨荧光仪特定的延迟时间测量，获得稀土元素的特异荧光信号，同时消除非特异性荧光物质的干扰。 四 胶体金标记分析技术技术（colloidal-gold immunoassay，CGIA） 采用胶体金为标记物，利用氯金酸（HAuCl4)在还原剂的作用下，形成红色的胶体状态。 [小结] 掌握: 1.放射免疫分析的原理 、方法 及质量控制 2.免疫放射分析的原理 熟悉: 放射免疫分析质量控制 * * 深圳大学第一附属医院 核医学科 申群喜 待测物质浓度与检测手段 临床化学分析 10 -12 10 -9 10 -6 10 -3 10 -0 pg/L ng/L mg/L mg/L g/L 免疫分析 Therapeutic Drugs