顾莹药物检测分析校内实训报告.docVIP

福建农林植物保护学院（黑体，字号小三） 药物检测分析校内实训报告（黑体，字号小二） （以下黑体，字号小三） 姓 名： 学 号： 成 绩： 指导老师：地点：福建农林大学实时间：20.6.27～.11 1 目的与意义 （）掌握高效液相色谱的基本原理、实验操作方法及注意事项； （）学会如何分析液相色谱图及如何处理实验数据2实训内容2.1.1试样制备 （正文部分宋体，字号体小四，行距固定值20磅，段落首行缩进2字符） A、汽水类 准确称取5.00-10.00克试样，精确至0.0001克，放入小烧杯中，微温搅拌除去其中的二氧化碳气体，加少量水稀释，用0.2mol/L的NaOH调pH为7，用玻璃棒小心将样品转移至25ml容量瓶中，并加水定容至刻度，摇匀，经0.45微米水洗膜过滤，待测。 B、饮料类 准确称取5.00-10.00克试样，精确至0.0001克，放入小烧杯中，加少量水稀释，用0.2mol/L的NaOH调pH为7，用玻璃棒小心将样品转移至25ml容量瓶中，并加水定容至刻度，摇匀，经0.45微米水洗膜过滤，待测。 2.1.3净化 1、配制20%的乙酸铵作为流动相，并且进行了过滤。 2、在上样之前用过滤器对样品进行了过滤。 2.2添加回收实验 操作步骤 精密称取超纯水5份，各10ml,加入0,01mg/ml的溶液1ml,按同样品前处理的方法处理后测定其回收率，计算其回收率和ＲＳＤ。 2.3高效液相色谱检测 2.3.1 高效液相色谱仪工作原理 HPLC由泵、进样器、色谱柱、检测器、馏分收集器、数据工作站、流动相溶剂瓶、梯度设备（萃取机）构成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出）由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。 2.3.2 高效液相色谱仪操作流程 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 进入HPLC控制界面主菜单设置相应参数。 进样： A、进样阀在INJECT模式，插入进样针。 B、将阀转到LOAD模式，注入样品。 C、将进样针留在阀上，将阀转回到INJECT模式。 D、取出进样针，清洗进样阀。 使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡。 数据采集及分析 A、数据采集：建好文件后，将进样阀转在INJECT模式即开始采集数据。 B、积分：在采集数据过程中或是已保存的数据都可以进行积分，选择“积分”页。 C、校正：结束积分后，可以通过“校正”页来进行校正。 D、生成报告：在“校正”页，选择“打印报告”，编辑报告或是将报告转为word格式等。 关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关2.3.3 高效液相色谱仪使用注意事项 （1）操作泵应该注意的问题 必须对溶剂进行脱气 勿空转 使用缓冲溶液之后一定要用水清洗 检查溶剂间的可混合性 启动泵之前要灌泵 控制脉冲 检查泵压 （2）使用进样阀的注意点 使用进样针前要清洗干净，并去除气泡 清洗进样针 : 选择样品易于溶解的溶剂 附加清洗方法 : 使用过的溶剂 → 丙酮 →二氯甲烷 使用自动进样器针管清洗溶液时要格外注意 连接管线越短越好 （3）样品处理注意的问题 通常都是将样品溶解在流动相中，流动相中样品的溶解度是最好的，通常进样前，我们用0.45um的过滤膜过滤样品。如果预先知道样品很脏，可以在进样前用0.2um的过滤膜过滤 （4）色谱柱操作中的注意事项 作为新色谱柱，最好在使用前，低于分析流速下（0.2-0.3ml/min）过大约30分钟。色谱柱如果长时间没有使用，再次投入使用前，也要做相似的工作。 关机时，最好逐步降低流速，不要突然降低压力，这样对色谱柱