山仙颗粒对气虚血瘀证肝癌侵袭转移相关因子影响的实验研究(精选).docVIP

肝癌气虚血瘀证与侵袭转移相关因子关系的实验研究 李仁廷 张晓炜 (陕西中医学院附属医院，陕西咸阳 712000) 摘要 ：目的：观察山仙颗粒对肝癌气虚血瘀证模型动物侵袭转移相关因子(MVD、VEGF)表达的影响。方法：将60只雄性ICR小鼠随机分成4组：15只为空白对照组(A组)，气虚血瘀造模，另45只为实验组，全部进行肿瘤造模及气虚血瘀造模，每组15只，分别为：肿瘤模型组（B组），山仙颗粒组(C组)，羟基喜树碱组(D组)。观察山仙颗粒对各组小鼠VEGF、MVD表达的影响。结果：山仙颗粒组(C组) VEGF、MVD的表达显著低于肿瘤模型组(B组)及对照药物羟基喜树碱组(D组)。结论：山仙颗粒具有抗气虚血瘀证肝癌侵袭、转移的作用。 关键词：肝癌，山仙颗粒，气虚血瘀，益气活血，中医药疗法 原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤,具有起病隐匿、进展迅速、生存期短、侵袭转移性强、预后差等特点。临床上疗效不理想，即使早期切除，术后 5年复发率仍高达 60%以上 (小肝癌为 40%～ 50% ) [1]，其根源就在于肿瘤早期即发生侵袭和转移。近年开展肝癌的局部治疗：如肝动脉化疗并栓塞、射频等，其转移复发率比切除还要高；即使作肝移植，癌转移复发仍然是首要问题 [2]。因此开展抗肝癌侵袭转移的研究在肝癌的防治方面具有极其重要的意义。 本实验旨在通过对H22肝癌瘤株转染的气虚血瘀型ICR小鼠各造模组治疗方法间的VEGF、MVD表达进行比较，探讨山仙颗粒抗肝癌气虚血瘀证侵袭转移的作用,从而为临床采用益气活血法治疗肝癌侵袭转移提供理论依据。 1 材料与方法 1.1实验动物及瘤株 瘤株：H22小鼠肝癌瘤株荷瘤小鼠（陕西省中医药研究院试验动物中心提供）。 实验动物：ICR健康雄性小鼠60只，16-18月龄,体重约25-30克（由陕西省中医药研究院实验动物中心提供 合格证号：医动字第02-24号）。 1.2 实验药品及试剂 1.2.1 药品 1) 山仙颗粒（由陕中附院制剂中心提供，生产日期每10克相当于原生药11.5克），按小鼠5g/kg（相当于临床用量）配制成比例为山仙颗粒：生理盐水为1：2（0.5g/ ml）的药液。 2) 羟基喜树碱（2mg/ml）：长春天诚药业有限公司生产,批号:990702，临用以生理盐水配制浓度为0.01mg/ ml的药液。 1.2.2 试剂 VEGF多克隆抗体（北京博奥生物技术有限公司，兔抗人IgG：Vegf：产品编号:bs-0297R）。 CD34多克隆抗体（北京博奥生物技术有限公司，兔抗小鼠IgG1：CD34产品编号：bs-0204R）。 S-P免疫组化染色试剂盒（兔sp检测试剂盒:北京中杉金桥生物技术有限公司，生产批号：512821CB） 1.4.4 给药 于接种瘤细胞悬液次日起给药，A、B组每日用生理盐水灌胃0.2ml/只/d，共21d；C组用山仙颗粒药液0.2ml/只/d灌胃，共21天；D组用羟基喜树碱溶液0.5ml/只/d腹腔注射，连用3天。 1.4.5 观察项目及方法 1.4.5.1 观察一般情况及体重 包括小鼠饮食、活动情况，精神状态，对刺激的反应，毛色变化，有无腹泻、消瘦及死亡，出瘤时间以及肿瘤节结的大小，并做好记录。 1.4.5.2 明确气虚血瘀模型是否建立成功 参照文献[3]方法进行评价。 1.4.5.3 观察实验指标 小鼠处死后取出腋下瘤体，常规固定、石蜡包埋、连续切片，采用SP法测定VEGF的表达和MVD。MVD计数对CD34染色的肿瘤微血管参照文献[]方法进行先在低倍镜(100倍)下全面观察切片选定残癌组织内血管密度最高处(即热点)然后在400倍镜下取3个视野分别计算所有染色的微血管取3个测定值的平均数为值阳性结果判定:采用半定量计分方法染色强度计分为不染色=0轻度染色(淡黄)=1，中度染色(棕黄)=2，强染色(深棕黄)=3。染色比例计分为无细胞染色=0小于25%细胞染色=125%～50%细胞染色=2大于50%细胞染色=3若两种计分之和小于2为阴性2～4为阳性大于或等于4为强阳性4只小鼠死亡，分别是：肿瘤模型组(B组)2只，山仙颗粒组(C组)1只，羟基喜树碱组(D组)1只。实验组小鼠接种肝癌细胞悬液后，约7-10天后，小鼠右腋下出现肿瘤，部分小鼠甚至出现皮下结节。气虚血瘀模型造模后实验组小鼠均出现精神萎顿、眼睛发红、毛发稀疏无光泽、大便稀溏、体重减轻、舌质暗淡、尾巴青紫等征象。给药后山仙颗粒组(C组)小鼠气虚血瘀模型评分基本维持不变，肿瘤模型组(B组)及羟基喜树碱组(D组)小鼠气虚血瘀模型评分均明显增高。实验开始时各组平均体重无显著性差异（P0.05）；实验结束时，未用药的气虚血瘀肝癌组（B组）小鼠体重明显较其他组小鼠轻，有显著性差异（P A(B 0.01, P C(B 0.01,