15-硕士课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因及其对策-胡忠研究.ppt

PCR常见问题、原因分析及其对策 主讲内容 PCR标准反应体系 PCR标准反应体系 PCR常见问题 无扩增产物 PCR常见问题之一 无扩增产物 PCR常见问题之二 PCR常见问题之二 PCR常见问题之三 PCR常见问题之三 PCR常见问题之四 四种策略 巢式PCR（Nest-PCR） 策略之一 巢式PCR（Nest-PCR） 策略之二 递减PCR（TouchDown PCR） 策略之三 热启动PCR （HotStart PCR） 策略之四 使用PCR增强剂 PCR技术简介 PCR常见问题、原因分析及其解决方案 提高PCR反应特异性的策略 PCR技术简介 DNA模板 引物 反应缓冲液 dNTP ddH2O 耐热聚合酶 反应体系对PCR扩增的影响 DNA模板 纯度 蛋白、多糖、酚类等杂质会抑制PCR反应 完整性 模板降解会导致PCR扩增无产物 浓度 加量过多导致非特异性扩增增加 特异性 长度适当、避免二级结构和二聚体 完整性 避免反复冻融 浓度 应适当,过高导致非特异性增加,过低则 引 物 扩增产物太少 反应体系对PCR扩增的影响 反应Buffer pH值,盐离子浓度 稳定剂,增强剂 Mg 2＋浓度 过高非特异性严重 过低无扩增产物 dNTP Mixture 浓度适当 避免反复冻融 ddH2O pH值适当 避免