液相色谱定量方法指导原则.pptVIP

标准加入法（二） b.可以加入一系列浓度，按标准曲线外推法计算出欲测物在样品中的含量。 优点：不需要另外的内标物，不必要进样非常准确；操作简单；若在前处理过程加入，可补偿被测组分在处理过程中的损失。 缺点：色谱条件要求完全一致，否则会带来分析误差。 7 常用的几种定量测定方法（十四）  7 常用的几种定量测定方法（十五）  标准加入法（三） 标准加入法标准曲线绘制 ① 将一系列已知量待测物分别加入到几等份的样品中，配制成浓度为(cx+0), (cx+c1), (cx+c2), (cx+c3)…….. 和样品有相同基体的标准系列溶液(加标，spiking)； ② 通过仪器分别测量以上系列溶液的响应值S0，S1，S2，S3，S4……； ③ 以响应信号S对浓度c作图，再将直线外推与浓度轴相交于一点(下图)，求得样品中待测物浓度cx。 cx 0.0 0.2 0.0 10 20 30 -10 浓度，c S S2 S3 S4 S1 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 ? 当样品量很少时，可在一份样品中加标，加一次作一次测量，可得到上述 方法相同的结果； ? 当觉得上述过程麻烦时，可只加标一次，分别测量样品和加标样品的仪器 响应，再直接通过公式进行计算。 优点：基体(matrix)相近，或者说基体干扰相同； 缺点：麻烦，适于小数量的样品分析。 8 影响定量准确度的因素 1、样品制备 --衍生化成可气化的或有紫外吸收或带荧光的，转化率要高 --溶剂 --样品回收率 --样品溶液的贮存 2、进样技术 --人员手动进样 --进样装置的准确性 3、色谱条件变化—柱温（气相）、流动相组成（液相）；柱效对峰高有影响，峰面积无影响（保证分离度的情况下） 4、检测器特性：线性范围和稳定性、特殊组分使用选择性检测器 问题 几种重叠峰的切割（一） 问题 重叠峰切割和计算（二） 问题 重叠峰切割和计算（三） 问题 重叠峰切割和计算（四） 问题 重叠峰切割和计算（五） 两峰等高误差最小，差距大，小峰误差大 谢谢！ * 在此 * 在此 液相色谱定性定量方法 1 有关色谱峰的基本概念（一） 峰底(CD):峰的起点与终点之间连接的直线 峰高(h):峰最大值到峰底的距离 峰宽(KL):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离 半高峰宽(W1/2):通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离 峰面积（A）:峰与峰底之间的面积,又称响应值 拖尾峰（Tailing peak）:后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰（Leading peak）:前沿较后沿平缓的不对称峰 基线（Baseline):在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线 基线噪声（N）:由各种因素所引起的基线波动 基线漂移(Baseline drift):基线随时间定向的缓慢变化 1 有关色谱峰的基本概念（二） 2 通过测量和计算得到的色谱参数（一） ?死时间(dead time，t0)—不保留组分的保留时间，即流动相（溶剂）通 过色谱柱的时间。 ?死体积(dead volume，V0)—由进样器进样口到检测器流动池未被固定 相所占据的空间。V0＝F×t0（F为流速） ?保留时间(retention time，tR)—从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。 ?保留体积(retention volume，VR)—从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积，又称洗脱体积。VR＝F×tR。 ?调整保留时间(adjusted retention time，tR)—扣除死时间后的保留时间。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR只决定于组分的性质，因此tR（或tR）可用于定性。tR＝tR－t0 ?调整保留体积(adjusted retention volume，VR)—扣除死体积后的保留体积VR＝VR－V0或VR＝F×tR 2 通过测量和计算得到的色谱参数(二） 柱效能：色谱柱在分离过程中主要有动力学参数决定的分离效能。通常用理论板数或有效板数表示。 理论板数： 若应用调整保留时间 tR′计算理论塔板数，所得值称为有效理论塔板数( n有效或 neff ) 有效板数： 2 通过测量和计算得到的色谱参数(三） 分离度：两个相邻色谱峰的分离程度，以两个组分保留值之差与其平均峰宽之比表示。 分离度图示 响应值：组分通