上海交通大学遗传学上午7组果蝇杂交实验.pptx

果蝇杂交实验方案 组员：郑书钰4 王艺辰3 卢春晓2 吴牡丹1 一、实验目的 1 观察认识果蝇性状。 2 了解果蝇生活史。 3 掌握果蝇的饲养方法。 4 学习杂交实验原理与方法，探索果蝇若干性状遗传规律。 5 验证基因伴性遗传的规律 6 验证基因连锁与交换规律并计算重组值 二、实验材料 黑腹果蝇Drosophila melanogaster P：白眼，小翅，卷刚毛（Xw m sn Xw m sn）三隐性突变体雌果蝇 红眼，长翅，直刚毛（X+ + + Y ) 野生型雄果蝇 果蝇的生活史 果蝇属完全变态昆虫，其完整的生活周期科分为卵、幼虫、蛹和成虫4个明显时期，如右图。? 25℃时成蝇一般在交配1~2天后开始产卵，卵长约0.5mm，白色椭圆形，前端背面有一对触丝使卵能附在食物或瓶壁上。 果蝇的完全变态发育： 卵（embryo）、幼虫（instar larva）、蛹（pupa）、成虫（adult） 果蝇的生活史 受精卵24小时内便孵化成幼虫，幼虫经两次蜕皮(分别为一龄幼虫，二龄幼虫）成为三龄幼虫，三龄幼虫体长可达4-5mm，用肉眼观察可见其一端稍尖，上有一黑色钩状口器，幼虫生活约4天左右开始结蛹并停止摄食，爬到相对干燥的表面，逐渐形成菱形的蛹。 果蝇的完全变态发育： 卵（embryo）、幼虫（instar larva）、蛹（pupa）、成虫（adult） 果蝇的生活史 从蛹中羽化出的果蝇8~12小时候即可交配，交配后精子可以在雌蝇的受精囊中储存一段时间，然后释放到输卵管中。所以杂交试验中母本必须使用未交配雌蝇。 为什么选择黑腹果蝇？ 黑腹果蝇生活史短，繁殖力强，相对性状明显且可遗传，易于培养，培养成本低，符合上述遗传学实验研究要求。 同时因其染色体仅4对，基因组仅约165Mb，并且基因组超过60%的片段同人类疾病基因相似。 果蝇性别及突变形状的鉴别 认识：红眼与白眼(w)，长翅与小翅(m), 焦刚毛(sn)与直刚毛,雄性与雌性， 性梳和平衡棍。 野生型：红眼、长翅、直刚毛 突变型：白眼、小翅、焦刚毛 杂交管的观察与记录 将所需品系的雌蝇与雄蝇放在一起培养，如果需要观察F1代的性状，7-8天后，需要倒掉亲本，避免F1代雌蝇与父本杂交，影响结果。 果蝇管标记（纸盖） 亲本管：P（+/-），组别：1（上午）-组数，2-（下午）-组数，接种时间； 杂交管：F1/F2，组别：1（上午）-组数，2-（下午）-组数，接种或杂交时间； 工具的使用 培养瓶：有培养基，纸盖与瓶口的密封， 毛笔：分突变型和野生型，勿混用 麻醉瓶：干燥、空的培养瓶，突变型和野生型勿混用，用棉塞 文具盒：中的工具保持完整 记录与标记 实验流程与步骤概述 亲本 8天后 子一代 突变型 弃亲本 继续培养 12h后羽化 雌果蝇 每隔12h 8天后 雄果蝇 子一代 收集30对雌雄，转瓶 子二代羽化， 观察 弃亲本 记录雌雄与眼色 8天后 弃亲本 记录 眼色，翅形，刚毛 记录雌雄与眼色 小组组员分工 记录表格设计 伴性遗传1 伴性遗传2 亲代 10只白眼，雌XwXw 10只 红眼，雄 X+Y f1 ____只 白眼，雄 Xw Y f1 ___只 红眼，雌 X+Xw 记录表格设计 连锁与交换 类别 基因型 表型 观察数 亲本型 X+ + +Xw m sn Xw m snY 红眼，长翅，直刚毛 白眼，小翅，卷刚毛 单交换1 单交换2 双交换 合计 日期 第一天 第二天 第三天 第四天 第五天 第六天.. 性状／只 性状／只 性状／只 性状／只 连续性状观察 成体果蝇好动，应用麻醉进行镜下观察，转瓶等操作。 麻醉动作： 左手小指与无名指夹取麻醉瓶瓶塞，瓶塞处滴加2-3滴乙醚。取果蝇培养瓶轻拍瓶壁，使果蝇震落在瓶底，再用左手无名指和中指夹取培养瓶塞，培养瓶口与麻醉瓶口对接，轻拍上面的培养瓶，将果蝇引入麻醉瓶。迅速盖塞约半分钟，果蝇行动缓慢。 观察完毕后，用干净毛笔将所需果蝇转移到侧卧的新培养瓶内，待它清醒，再竖立加塞，防止果蝇粘在培养基上。 实验操作 麻醉 处女蝇的收集 准备好亲本培养管后，每天中午12：00观察记录果蝇的情况，在观察到发黑的蛹时，将成蝇全部赶去，羽化后8小时内挑选处女蝇。为了方便起见，建议每天早晨8：00～9:00将培养瓶内成蝇杀死，次日傍晚17:00～19:00对新羽化出的果蝇进行挑选。可以多收集几只，一组做实验用，一组单独培养观察3天，看是否有卵产生