第六章酶工程.ppt

酶和细胞的固定化 定义 酶的固定化 细胞的固定化 应用 固定化酶 是指在一定空间内呈闭锁状态的酶，能连续的进行反应，反应后的酶可以回收重复使用。 固定化酶的特点 可以多次使用，稳定性提高 易于提纯，产品质量高 易于控制，实现连续化和自动化控制 酶利用率高 比水溶性酶更适于多酶反应 酶的固定化 载体结合法 将酶固定到非水溶性载体上的方法。根据固定方式的不同，这种方法又可以分为物理吸附法、离子结合法和共价结合法。 交联法 通过双功能试剂，将酶和酶联结成网状结构的方法。交联法使用的交联剂是戊二醛等水溶性化合物。 包埋法 将酶包裹在多孔的载体中 优点： 固定化时酶分子的构象很少 或基本不发生变化。 缺点： 结合力弱，易解吸附。 载体： 纤维素、琼脂糖、活性炭、 沸石及硅胶等。 微胶囊固定化酶制备方法 界面聚合法 将酶水溶液和亲水单体用一种与水不溶的有机溶剂制成乳化液，再将溶于同一种有机溶剂的疏水单体溶液边搅拌边加入到上述乳化液中，在乳化液中的水相和有机相之间的界面发生聚合作用，酶即被包埋于聚合体膜中。 液体干燥法 将一种聚合物溶于一种沸点低于水且与水不溶的有机溶剂中，加入酶的水溶液，以油溶性表面活化剂，制成第一乳液。把它分散于含有保护性胶质、聚丙烯醇和表面活性剂，形成第二乳液。在不断搅拌、低温和真空条件下蒸出有机溶剂，得到含酶微胶囊。 其他方法 脂质体包埋法、纤维包埋法等 细胞的固定化 优越性 保持了胞内酶系的原有状态和天然环境，因而更稳定。 局限性 （1）利用的仅是胞内酶，且副产物多 （2）细胞膜、细胞壁和载体存在扩散限制作用 （3）载体孔隙的大小影响高分子底物的通透性 酶的人工模拟 一、模拟酶的概念和理论基础 二、模拟酶的分类和制备 三、印迹酶 一．模拟酶的概念和理论基础 概念 根据酶的作用原理，用各种方法认为制造的具有酶性质的催化剂，简称人工酶活模拟酶 模拟酶的理论基础 模拟酶的酶学基础： 主-客体化学和超分子化学 1. 模拟酶的模拟酶的酶学基础 过渡态理论 对简化的人工体系中识别、结合和催化的研究 2.主-客体化学和超分子化学 主-客体化学：主体和客体在结合部位的空间及电子排列的互补 超分子：该分子形成源于底物和受体的结合，这种结合基于非共价键相互作用，当接受体与络合离子或分子结合形成稳定的，具有稳定结构和性质的实体，形成超分子 功能：分子识别、催化、选择性输出 二．设计要点 设计前： 酶活性中心-底物复合物的结构 酶的专一性及其同底物结合方式 反应的动力学及各中间物的知识 设计中： 为底物提供良好的微环境 催化基团必须相对于结合点尽可能同底物的功能团相接近 应具有足够的水溶性，并在接近生理条件下保持其催化活性 三、模拟酶的分类 分类依据 Kirby分类法 按照模拟酶的属性 Kirby分类法 单纯酶模型 机理酶模型 单纯合成的酶样化合物 1. Kirby分类法 单纯酶模型： 化学方法通过天然酶活性的模拟来重建和改造酶活性 机理酶模型： 通过对酶作用机制诸如识别、结合和过渡态稳定化的认识，来指导酶模型的设计和合成 单纯合成的酶样化合物 化学合成的具有酶样催化活性的简单分子 2. 按照模拟酶的属性 主-客体酶模型 胶束酶模型 肽酶 抗体酶 分子印迹酶模型 半合成酶 2．环糊精结构示意 胶束酶模型 第三节 印迹酶 一 分子印迹技术概述 二 分子印迹酶 分子印迹酶 1．分子印迹概念：制备对某一化合物具有选择性的聚合物的过程 2. 分子印迹技术内容 选定印迹分子和功能单体，使二者发生互补反应 在印迹分子-单体复合物周围发生聚合反应 用抽提法从聚合物中除掉印迹分子 3．分子印迹酶 通过分子印迹技术可以产生类似于酶的活性中心的空腔，对底物产生有效的结合作用，并可以在结合部位的空腔内诱导产生催化基团，并与底物定向排列。 性质：遵循米氏方程，催化活力依赖反应速度常数。 生物印迹 生物印迹：指以天然的生物材料，如蛋白质和糖类物质为骨架，在其上进行分子印迹而产生对印迹分子具有特异性识别空腔的过程。 非水相生物印迹酶制备示意图 抗体酶 一、抗体酶的概念 二、抗体酶的催化特征 三、抗体酶的催化作用机理 四、抗体酶的催化反应类型 五、抗体酶的制备方法 六、抗体酶的应用 4. 抗体库法 用基因克隆技术将全套抗体重链和轻链可变区基因克隆出来，重组到原核表达载体，通过大肠杆菌直接表达有功能的抗体片段，从中筛选特异性的可变区基因 在医疗上的应用 抗体酶在帮助戒毒方面的应用 Landry等用可卡因水解