罗非鱼骨胶原蛋白的提取及其性质-食品与生物技术学报.docVIP

罗非鱼骨胶原蛋白的提取及其性质 叶 韬, 林 琳, 张晓霞, 姜绍通, 陆剑锋*( （合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽 合肥 230009） 摘要:为充分利用鱼片加工废弃物鱼骨中的胶原蛋白,采用单因素以及正交实验法,研究胃蛋白酶在酸性介质条件下提取罗非鱼骨胶原蛋白的最佳工艺,精制后的胶原蛋白采用SDS电泳、紫外及傅立叶变换红外扫描,圆二色检测,氨基酸分析,热变性温度测定等方法分析胶原蛋白的理化性质。结果显示：乳酸溶液pH 2.6,温度30℃,料液比1:30（g/mL）,加酶量200 U/g,提取时间24 h,此工艺条件下的粗胶原蛋白提取率达到70.%,得率为12.%;罗非鱼骨胶原蛋白含有2条α链和1 条β链,属于典型的I 型胶原蛋白;罗非鱼骨胶原蛋白的主要氨基酸为甘氨酸,脯氨酸,羟脯氨酸,谷氨酸和丙氨酸;罗非鱼骨胶原蛋白的热变性温度为34.5℃。研究表明,采用胃蛋白酶提取鱼骨胶原蛋白,提取率和纯度均较高。 TS 254.9;S 986.3 文献标识码： A 文章编号: 罗非鱼是目前我国出口创汇的优势养殖品种,2012年养殖产量约为145万t,出口产品以冻鱼片为主。在加工鱼片的过程中,产生大量低商业价值的下脚料,其中大部分是鱼骨,而鱼骨蛋白含量丰富,且主要为胶原蛋白,因此大量的下脚料蕴含着巨大的胶原蛋白资源[1]。 胶原蛋白是动物体内含量最多的一类蛋白质,占机体总蛋白含量的30%左右,它在医疗保健、食品工业、美容与化妆品、新型生物材料等领域有着广泛应用[2]。传统工业上的胶原蛋白来源主要为牛羊的皮和骨,但由于畜传染病,宗教信仰等原因,致使水产动物胶原蛋白的安全性和适用人群范围均优于传统来源的牲畜类胶原蛋白[3]。此外,从水产品加工废弃物中提取胶原蛋白,不仅有助于降低加工成本,增加产品的附加值,而且可以减少环境污染。 Zeng等[4]采用乙酸提取罗非鱼皮胶原蛋白,研究了胶原蛋白的氨基酸含量、紫外吸收特性、变性温度及溶解性等理化性质;曾少葵等[5]用胃蛋白酶从罗非鱼鳞中提取胶原蛋白,并对酶解产物的抗氧化性进行研究,表明酶解产物具有良好的抗氧化效果;段宙位等[6]以罗非鱼尾为原料,研究鱼尾脂溶性色素的去除方法及胶原蛋白的提取工艺,测定胶原蛋白的纯度为84.61%,并通过紫外吸收光谱和蛋白电泳初步鉴定为Ⅰ型胶原蛋白。然而,国内外学者对罗非鱼骨胶原蛋白的研究报道较少。鉴于此,本文对罗非鱼骨胶原蛋白的提取工艺进行优化,并对其理化性质进行检测,为今后综合开发利用罗非鱼片加工副产物提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 广东明基水产品有限公司1:3000活力为5346 U/g）:购于上海源聚生物科技有限公司;柠檬酸、乳酸、乙酸和浓盐酸等:购于合肥美丰化工仪器有限公司,均为分析纯。 1.2 仪器与设备 722E型可见分光光度计:上海光谱仪器有限公司;DHG-9123J精密恒温鼓风干燥箱:上海三发科学仪器有限公司;FD-1B-50冷冻干燥机:北京博医康实验仪器有限公司;TU-1901 双光束紫外分光光度计:北京普析通用器有限公司;Nicolet 67傅里叶红外光谱仪:美国 Thermo Nicolet公司;L-8800 氨基酸分析仪:日本日立公司;DYY-11型电泳仪:北京六一仪器厂;VP-DSC微量差示扫描量热仪:美国 MICROCAL公司;J-810圆二色光谱仪:日本JASCO公司。 1.3 罗非鱼骨鱼骨基本营养成分测定 水分：参照GB 5009.3-2010《食品中水分的测定》中直接干燥法进行测定;灰分：参照GB 5009.4-2010《食品中灰分的测定》中灼烧称重法进行测定;粗蛋白：参照GB 5009.5-2010《食品中蛋白质的测定》中凯氏定氮法测定;粗脂肪:参照GB/T 5009.6-2003《食品中脂肪的测定》中索氏抽提法测定。 1.4 胶原蛋白提取原料的制备 工艺流程:罗非鱼骨→粉碎→脱脂→脱矿物质→脱杂蛋白→脱杂鱼骨 工艺说明[7]:脱脂:在粉碎的鱼骨中加入30倍的10%的异丙醇,浸泡24 h,过滤,蒸馏水洗净;脱矿物质:15℃条件下,加入8倍0.5 mol/L的盐酸,浸泡1 h,重复3次,蒸馏水洗净;脱杂蛋白:先用 NaOH（0.1 mol/L）溶液浸泡6 h,过滤,蒸馏水洗净,再用30倍体积的2.5% NaCl溶液浸泡6 h,蒸馏水洗净。 1.5 胶原蛋白提取工艺与纯化 工艺流程:脱杂鱼骨→调节料液比→加酶控温酶解→离心→取上清液→粗提的胶原蛋白→盐析→透析→冷冻干燥→精制的胶原蛋白 工艺说明[8]:盐析:取上清液加NaCl至其终浓度为0. 9 mol/L,4℃盐析过夜,盐析后4℃下6000 r/min离心20 min,沉淀用0. 5 mol/L乙酸溶解,重复操作1