生物大分子的分离.ppt

生化与分子生物学学科 2011.3 生物大分子？ biomacromolecule 荧光光度法： ①溴乙锭 EB Ethidium bromide 核酸荧光染料，可嵌入碱基平面，本身无荧光，但在紫外线激发下发出红色的荧光，且荧光强度积分与核酸含量呈正比。 DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身则在302nm和366nm有光吸收。这两种情况下，被吸收的能量可在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。 灵敏度可达1～5ng。 ②SYBR Gold一种新的超灵敏荧光染料，灵敏度达20pg。Syber green I 纯RNA: A260/A280=2.0（1.8~2.1） 由于受pH影响，应用水溶液加空白对照测定A260/A280 。 使用各种不同的DNA提取方法，从EDTA抗凝血液中提取基因组后，进行脉冲电泳，基因组DNA的大小分布情况。 HL60细胞总RNA电泳结果 大鼠脾脏DNA电泳结果 1.加入Sample Protector 37℃保存一天 2.加入Sample Protector 25℃保存一周 3.不加入Sample Protector 37℃保存一天 DNA与RNA分离纯化方法比较 五、蛋白质样品的定量分析