四川省猪嵴病毒病流行病学调查和间接ELISA抗体检测方法的建立.pdfVIP

RDP和Simplot预测，发现3株共感染的猪嵴病毒A1、A2、A3之间存在重组事件， A2序列的VPl区段可能是由于A1和A3之间发生重组产生的。重组事件的发生会 推动病毒基因组的进化，导致基因多样性的发生。 本研究通过BepiPred、Bcepred、DNAStar中Protean来预测分析猪嵴病毒VPl 蛋白线性抗原表位，综合各种预测结果，选择抗原表位较集中、抗原指数较高的前半 段(1—462bp)作为猪嵴病毒优势抗原表位区，将选取的基因片段送公司进行密码子 优化后合成基因，将合成的基因片段定向克隆至原核表达载体pET32a(+)00，构建重 组表达质粒pET32一VPl，转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达，通 过对诱导条件进行优化，确定37。C，0．2mmol／L IPTG诱导表达4h为最佳诱导条件， 重组蛋白大小为35．6KDa，以可溶性形式存在，在Western blot检测中，通过Ni柱纯 化的VPl重组蛋白和猪嵴病毒阳性血清存在特异性反应，说明重组蛋白具有良好的 抗原性。 利用纯化的重组蛋白作为包被抗原，初步建立猪嵴病毒抗体检测间接ELISA方 法，并对间接ELISA反应的各个条件进行优化，结果显示，抗原的最佳包被浓度为 2pedmL，血清最适稀释倍数为1：200，37。C 1h+4℃过夜为重组蛋白最适包被条件， 5％脱脂奶粉封闭90min为最