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革兰氏染色的步骤及结果对照
革兰氏染色的步骤及结果对照
1. 涂片。首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水,用灼烧过的接种针挑取少量细菌,置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开,注意涂抹要均匀平坦,涂抹后直径约为1 cm的薄层。
2. 固定。将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次,以载玻片的加热面接触手背皮肤,不觉过烫为佳,待冷却后再在火焰上方来回通过一两次,再冷却,这样重复操作直到薄层干了为止。
3. 染色。在制好的片上滴一滴草酸铵结晶紫,染色1 min后用水洗,注意水流不要直接对准薄层。
4. 媒染。加路哥式碘液大概一滴,作用1 min后用水冲洗,注意流水不要直接往薄层上冲,用过滤纸吸干。
5. 脱色。用95%乙醇脱色,一般脱色时间大概为30 s。这一步是革兰氏染色的关键,必须严格掌握好,如果脱色时间过长则会把阳性菌误认为阴性菌;如果脱色不够则容易被误认为是阳性菌。
6. 水洗后用过滤纸吸干。复染。
滴加0.5%的番红染色一滴,液染色10~30 s后,用自来水冲洗。
7. 观察。干燥后,用油镜镜检观察,并做好记录。
过程示意图如下:
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