琼脂糖凝胶电泳及DNA纯化资料.ppt

实验二琼脂糖凝胶电泳及DNA的纯化 一、实验目的 1、掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法 2、掌握回收试剂盒纯化DNA的方法 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 二、实验原理 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。因而就可依据DNA分子的大小使其分离。该过程可以通过把分子量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。 溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其荧光强度与DNA的含量成正比。据此可粗略估计样品DNA浓度。 注意事项： EB是有毒物质，切勿用手接触，更不要污染环境。 实验过程中操作要保持安静、镇定，注意样品不能混样， 三、实验材料、器具及药品 电泳： 实验一的PCR产物样品。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外凝胶成像系统等。 琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，溴化乙锭（EB），6X载样缓冲液 纯化： 回收试剂盒 四、实验步骤 ⑴ 1g 琼脂糖加入100ml 1×TAE电泳缓冲液中