大鼠白介素1β (IL-1β)酶联免疫分析试剂盒使用说明书.doc

大鼠白介素1β (IL-1β)酶联免疫分析试剂盒使用说明书 大鼠白介素1β （IL-1β）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：3.12 pg/ml - 200 pg/ml 最低检测限：0.78 pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠IL-1β，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-1β含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 概述 白介素-1（IL-1）又称淋巴细胞刺激因子，分为IL-1α和IL-1β两种，它们由不同的基因所表达，分子量为15kDa，但其PI分别为5和7。两者分别由159和153个氨基酸组成，氨基酸顺序之间只有26%的同源性，但与同一种膜受体相结合。IL-1主要由血液中的单核细胞和巨噬细胞所产生。T淋巴细胞，B淋巴细胞，各种上皮细胞，内皮细胞和间质细胞也能产生IL-1。血液中的IL-1主要为单核细胞和巨噬细胞所产生的IL-1β。IL-1是急性期免疫反应的主要调节因子，它在T细胞激活，诱导IL-2产生起着基本的作用。这些调节作用的产生主要通过作用在神经系统，骨髓干细胞发生作用。这些调节作用大多数是IL-1β直接产生的，但有些是于其他细胞因子如IL-6、IFN、TNF协同作用下发挥效应的。正常人血液中不含IL-1β或者含量很底。IL-1含量升高表明机体内有组织损伤或者感染产生，如阶段性回肠炎败血症等。神经系统的炎症和损伤时，脑脊液中IL-1水平上升。在感染性胸膜，腹膜渗出液中，IL-1水平上升。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-1β抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-1β抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-1β呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。 3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。 5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。 6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1. 标准规格酶标仪 2. 高速离心机 3. 电热恒温培养箱 4. 干净的试管和Eppendof管 5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg