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大鼠白介素1β (IL-1β)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
大鼠白介素1β (IL-1β)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
大鼠白介素1β (IL-1β)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
检测范围:3.12 pg/ml - 200 pg/ml
最低检测限:0.78 pg/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠IL-1β,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-1β含量。
说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
概述
白介素-1(IL-1)又称淋巴细胞刺激因子,分为IL-1α和IL-1β两种,它们由不同的基因所表达,分子量为15kDa,但其PI分别为5和7。两者分别由159和153个氨基酸组成,氨基酸顺序之间只有26%的同源性,但与同一种膜受体相结合。IL-1主要由血液中的单核细胞和巨噬细胞所产生。T淋巴细胞,B淋巴细胞,各种上皮细胞,内皮细胞和间质细胞也能产生IL-1。血液中的IL-1主要为单核细胞和巨噬细胞所产生的IL-1β。IL-1是急性期免疫反应的主要调节因子,它在T细胞激活,诱导IL-2产生起着基本的作用。这些调节作用的产生主要通过作用在神经系统,骨髓干细胞发生作用。这些调节作用大多数是IL-1β直接产生的,但有些是于其他细胞因子如IL-6、IFN、TNF协同作用下发挥效应的。正常人血液中不含IL-1β或者含量很底。IL-1含量升高表明机体内有组织损伤或者感染产生,如阶段性回肠炎败血症等。神经系统的炎症和损伤时,脑脊液中IL-1水平上升。在感染性胸膜,腹膜渗出液中,IL-1水平上升。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗IL-1β抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-1β抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-1β呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释200 pg/ml,100 pg/ml,50 pg
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