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- 2016-08-22 发布于河南
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离心
离心技术
离心原理
颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同,在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同,由此便可以得到相互间的分离。
离心力
溶液中的固相颗粒做圆周运动时产生一个向外离心力,其定义为:F = ma=mω2r其中:F 为离心力的强度; m 为沉降颗粒的有效质量;ω 为离心转子转动的角速度,其单位为radian/s;r 为离心半径(cm),即转子中心轴到沉降颗粒之间的距离。
相对离心力(RCF)
在离心场中,作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数。
∴ RCF = 1.119×10-5×(rpm)2r
rpm---revolutions per minute为每分钟转数,
r/min
低速离心时常以转速“rpm”来表示
高速离心时则以“g”表示
Svedberg
The Svedberg
The Nobel Prize in Chemistry 1926
1924年,T.Svedberg制成了第一台5000×g(5000 r/min~8000 r/min)相对离心力的超离心机,奠基了“超离心技术”,开创了生化物质离心分离的先河,并准确测定了血红蛋白等复杂蛋白质的分子量,获得了1926年的诺贝尔化学奖
沉降系数
(sedimentation coefficient,s)
在沉降速度中, m 、f 很难精确测定。因此,常用沉降系数(sedimentation coefficient)去描述一些结构和分子量都暂不清楚的大分子化合物的大小。
沉降系数定义为沉降速度与离心力的比率,即:
S = ?/ [?2r ]
沉降系数的单位为s(秒),1 S=10- 31 s
特定的蛋白质有特定的沉降系数,故可根据沉降系数来分离和鉴定蛋白质。蛋白质和其他生物大分子的沉降系数介于1~200S之间。
一般来说分子量大的S也大,分子量小的S也小,但分子量与沉降系数不成正比,因为沉降系数还受到蛋白质分子形状等因素的影响。
表:几种蛋白质的分子量和沉降系数
蛋 白 质
分子量
沉降系数(S)
细胞色素C(牛心)
13 370
1.17
肌红蛋白(马心)
16 900
2.04
糜蛋白酶原(牛胰)
23 240
2.54
β-乳球蛋白(羊奶)
37 100
2.90
血红蛋白(人)
64 500
4.50
血清白蛋白(人)
68 500
4.60
过氧化氢酶(马肝)
247 400
11.30
脲酶(刀豆)
482 700
18.60
纤维蛋白原
339 700
7.60
沉降速度
固体在沉降过程中,会遇到摩擦阻力Ff
Ff =f ?
f =摩擦系数(取决于固体颗粒的大小和形状以及液相介质的密度和粘度。
?=沉降速度
当离心力等于摩擦阻力时,固体颗粒以恒定速度沉降,此时
F = Ff
m?2r = f ?
? =[m ?2r]/ f
离心机的主要构造和类型
工业用离心机
离心机
制备性离心机
实验用离心机
分析性离心机
制备性离心机可分为三类
1.普通离心机:最大转速6000rpm左右
2.高速冷冻离心机:最大转速为20000~
25000rpm(r/min)
3.超速离心机:转速可达50000~80000rpm,
装有真空系统,这是它与高速离心机的主
要区别。
转头
水平转头
角式转头
荡平式转头
垂直转头
离心管
塑料离心管常用材料有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)等,其中PP管性能较好。塑料离心管的优点是透明(或半透明),硬度小,可用穿刺法取出梯度。缺点是易变形,抗有机溶剂腐蚀性差,使用寿命短。
不锈钢管强度大,不变形,能抗热,抗冻,抗化学腐蚀。但用时也应避免接触强腐蚀性的化学药品,如强酸、强碱等。
控温系统
实验室离心机有低温控制和常温2种,但超过18000r/min的机型多为低温控制。低温控制多为一级压缩机无氟制冷,控温范围一般在-9~-40℃或-20~-40℃,精度≤1℃。具有预冷程序、待机状态可恒冷维持功能,以适应实验室机动性、连续性工作需要。
安全保护
具备自保护措施对离心机安全操作非常重要,如:自动锁盖、超温、过速、失平衡保护等,一旦发生误操作将发出提示声音报警。
离心操作的注意事项
使用各种离心机时,必须事先在天平上精确平衡离心管和其内容物,转头
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