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2. C末端的测定 常用羧基肽酶法 羧基肽酶专一地将肽链水解成片断，分别进行顺序分析。 第三步 肽链的局部水解 胰蛋白酶的作用原理 1. 酶解法 CNBr与Met反应测定Pr的一级结构 2. 化学法 层析鉴定就可N-端开始确定被测肽段的氨基酸排列顺序 第四步 肽段氨基酸顺序分析 一般采用 Edman降解法 弱碱条件 异硫氰酸苯酯 + N端α-氨基 苯氨基硫甲酰肽(PTC-肽） 酸性条件 环化 水解 苯乙内酰硫氨基酸(PTH-aa) 失去原N-端氨基酸的肽 剩下的肽可反复进行上述处理，依次生成各种PTH-aa， Edman降解法的示意图 　 一般常用多种方法使肽链断裂，并分析出各肽段中的氨基酸顺序。由于在不同部位断链，只要找出多套肽段的重叠部位，然后组合排列对比，即可推断肽段的排列顺序，从而得出完整肽链中氨基酸的顺序。 第五步 肽链一级结构的确定 则其氨基酸排列顺序为： 　Thr-Asn-Val-Lys-Ala-Trp-Gly-lys 如测一个九肽 测得N端氨基酸残基为Thr 又分别测得片断: Ala-Ala-Trp-Gly-Lys  Val-Lys-Ala-Ala-Trp Thr-Asn-Val-Lys 另外，亦可以通过基