植物基因组学.doc

提高紫外线辐射UV-B降低植物基因组稳定性 平流臭氧层的长期消耗能够增加陆地表面接受的太阳能的紫外线辐射UV-B。这对生物体有不良影响，例如DNA伤害。当暴露于提高了的UV-B辐射时（UV-B; 280±315 nm），植物会表现出各式各样的生理学和形态学的特征来回应以便适应环境。我们将展示，用特殊的太阳光模拟器来提高UV-B辐射的确能够提高拟南芥和烟草植物植株内同源DNA重组的频率。重组的增加伴随着光复合酶的强烈感应现象和Rad51基因的表达。这些基因确定地包含于主要的DNA修复路径、光致复活作用和重组修复中。拟南芥的突变体光致复活过程中紫外感应的环丁烷嘧啶二聚体是不足的，在提高UV-B下的重组是大大超过野生型水平的。我们的结果显示同源重组修复路径可能包含消除在植物中的UV-B影响的DNA损害。因此，增加陆地表面的UV-B辐射可以预期为21世纪早期影响植物基因组稳定性的因素。 平流臭氧层是减少太阳光UV-B辐射到地球表面最关键的因素。因此，臭氧层的连续消耗会伴随着陆地上UV-B的辐射增加，特别是在300nm波长以下。鉴于UV-B在植物生长、发育、生理学和形态学中的影响已经被集中的研究，少量的了解了一些在植物基因组稳定性上的影响。由于基因组含有大量重复排列的DNA序列和很多同源的基因家族，因此同源重组对植物特别重要。此外，在植物细胞内的同源DNA序列间的重组会被DNA损伤机制强烈刺激。 为了获得一个关于长期提高UV-B辐射强度对植物基因组的影响真实的判断，我们将拟南芥和烟草植株的几个世代暴露在不同水平的UV-B辐射下。基因组的稳定性通过分析被测植株的基因重组和后代来检测。为了模仿自然的阳光环境，我们提供了800μmol m-2 s-1光合作用辐射的自然光谱平衡和19Wm-2,UV-A，在这种情况下光生物学进程会被正常的生理学水平激活。这种光谱是由四种不同的UV-B补充，这四种UV-B通常是做为生理学上很有效的UV-B被给出，一般为300nm。（细节参照发射光谱和交替增加的补充信息）环境的UV-B机制，UV-B1(2.3 kJm-2 d-1BE) and UV-B2 (6.6 kJm-2 d-1BE),是在当前的北纬中纬度（40 N±60N），垂直高度水平面1000m以上的范围内。两种高的UV-B机制，UV-B3 (18.6 kJm-2 d-1BE) and UV-B4(27.1 kJm-2 d-1BE)，被用于测试植物对强的UV-B辐射的反应。 提高UV-B辐射对植株重组频率的影响用转基因烟草体系和四个独立的拟南芥体系来分析，拿一个或多个重组的报告转基因拷贝，每个是唯一且不同的。所有的重组基底包含两个重叠的β-葡萄糖醛酸酶基因片段，这两个片段是纵向定位或是反向重复序列并且被匀霉素抗性基因打断。在这些重叠序列间的基因重组导致了一个完整的、有功能的β-葡萄糖醛酸酶基因。这两个重叠基因重叠部分的长度和重组基底每个部分的序列定向(Table 1)。在用组织化学法染色植物后，重组变得很直观，它们的编码和位置很确定(Fig. 1a±e)。 在所有的图谱测试，植株的重组率是在最近环境UV-B（1.0±0.2）×10-7----(3.5±0.5)×10-5水平每个基因组的重组事件(Table 1)。图谱间的大的变化可能导致重组基底的结构、转基因拷贝数量和植物物种不同。在基因组中重组基底混乱的位置不同，可能会是复制行为和重组率的重要影响因素。 由所测的植株图谱可见暴露在不同的UV-B辐射水平下引发形态学变化而且明显的影响了植株的重组率(Table 1)。在已提高的UV-B但在生态学上仍很重要UV-B2下，在烟草和拟南芥体系中的重组率增长值仍值得注意。在line N9 rose 4.6-fold, in line A11 1.7-fold, in lineA211 4.6-fold and in lines A231 and A651 twofold.的重组率。由于很高的UV-B辐射，UV-B3 和 UV-B4,重组甚至被在UV-B1到UV-B3之间超过8.5-fold和在UV-B1到UV-B4之间超过14-fold所影响。看起来，一般在已提高的UV-B辐射下的重组感应不受植株物种和序列分析的支配，而且可能一个很大的基因组范围内由于不同的轨迹具有不同的专一性。由UV引起的DNA损伤的信息和位置，和DNA修复进程的辅助性核行为一样，被核染色质结构很大影响，在酵母和哺乳动物细胞中影响最小。在植物基因组内不同的位置可能会在重组行为中对不同增长的UV-B压力做出反应。 在提高UV-B辐射后重组水平增加可能是增强的伤害和受影响的DNA修复的直接后果。测试由UV-B引起的DNA伤害修复是否影响重组，我们越过转基因的拟南芥带有