基于新型量子点多功能探针的电化学传感器资料.docxVIP

第二章基于新型量子点多功能探针的电化学传感器1引言在过去的十年，量子点由于其独特的性质和在生物医学的应用而引起人们越来越高的研究兴趣[1]。自从硅量子点的电致化学发光（ECL）被Bard[2]首次发现后，半导体纳米材料的ECL得到了很大的关注[3,4,5]，基于QD的ECL分析技术已经迅速发展到许多领域[6,7,8]。在众多的DNA检测技术中，电致化学发光技术具有很多优势，如成本低廉，分析范围广，背景信号低，灵敏度高等，已经广泛应用于生物传感器 [9,10,11]。而且，适体作为单链核酸可以与蛋白质分子或靶细胞特异性结合，近几年，量子点ECL也应用于目标适体检测 [12-16]。然而，基于量子点的ECL信号还不高，迫切需要探索新技术增强量子点的ECL信号。Dendrimers是高度分支的树枝状大分子，末端具有很多官能团，容易功能化 [17,18]。据报道，树枝状聚合物纳米簇已经合成，并应用于肿瘤细胞的活体检测 [19]。而且，树枝状高分子/ CdSe-ZnS量子点纳米结构也被应用于癌细胞的ECL检测中[20]。DNA杂交检测在分子生物学、疾病诊断、基因表达研究等领域非常重要 [21]。而且，癌症是当今最紧迫的影响健康的问题。根据报道，对癌细胞的灵敏监测能提供一种监控疾病发展的简单和有效的方法 [22-24]。因此，研究对癌细胞精确和灵敏的识别和检测对癌症的诊断和治疗具有非常重要的作用。值得注意的是，近几年基于适体对肿瘤细胞的特异性识别和检测技术已经成为热点研究领域 [25-27]。因此，我们提出了用树枝状量子点纳米簇作为多功能探针，通过电化学和电致化学发光技术检测DNA和癌细胞。CNTs/ 金纳米粒子以其表面积大、稳定性高、生物活性好等优势成为了固定生物分子的一种可靠的放大平台。特别是dendrimer/QDs 纳米簇作为信号放大探针应用于电致化学发光和电化学检测DNA和细胞的方法中。而且，利用磁性纳米粒子固定细胞适体，极大简化了分离过程。本文提供了一种高灵敏度，高选择性，简便、低损耗的精确检测DNA和癌细胞的方法和技术。2实验部分2.1 材料和仪器2.1.1材料所有合成的寡核苷酸均从上海生工生物工程技术服务有限公司（中国）购买。寡核苷酸的序列如下：DNA Sequence C-DNA 5’-SH-TAC AGA GGG T CTC CTC CCG GTG-3’random DNA： 5- SH-ATG TCT CCCA CTC CTC CCG GTG-3 Target DNA: 5’-GCC GCT CAC ACG ATA CCT AAT GTG CACCGG GAG GAG ACC-3’Two base mismatch: 5’-GCC GCT CAC ACG ATA CCT AAT GTG CACCCG GAG GAC ACC-3’noncomplementary sequences: 5’- GA GGA TAG TTC GGT GGC TGT TCA GGG T CTC CTC CCG GTG-3’C-aptamer 5’- GCC GCT CAC ACG ATA TAC AGA ACA CCG GGA GGA TAG TTC GGT GGC TGT TCAG GGT TTT HS-3’first-probe DNA (p1-DNA): 5-TAT CGT GTG AGC GGC TTT TTT- NH2-3bio-bar-code DNA (bbc-DNA)：5-GCT CAT ATG GAC CTC TTT TTT- NH2-3表2-1 方案1的DNA序列Table 2-1 The Sequences of the DNA in Scheme 1氧化镉(CdO, 99.99%),醋酸镉(99.9%, powder),硒粉(99.9%, powder), 硫磺(99.9%, powder), 三辛基磷 (TOP, 90%), 油酸 (OA, 90%), 1-十八烯 (ODE, 90%),巯基丙酸 (MPA, 99.8%) 和6-巯基-1-己醇 (MCH) 是从Aldrich公司购买的。第五代树枝状高分子聚合物 (ethylenediamine core, generation 5)溶剂从 Sigma-Aldrich (上海) 贸易有限公司购买的。乙基-（3-二甲基丙基）碳二亚胺盐酸（EDC）从Sigma购买的。Fe3O4-Au核壳磁性纳米粒子(MNPs， Fe3O4@Au) (~50 nm)从陕西Life