我的细胞融合与单克隆抗体分析.ppt

?抗体 ?抗原 ?应答 ?抗体的不纯性 ?怎么才能得到纯的抗体? ?光纯还不行,还要大量.怎么办? ?但，有问题: ?找，什么细胞能无限繁殖呢? ?思路就出来了: 结合同位素的单抗 在培养液中加入氨基蝶呤，收集增殖细胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有 D 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的 S 途径合成DNA而增殖。 通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。 ②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。 (5)如何得到大量的单克隆抗体？ 体内培养 体外培养 单克隆抗体 ——化学性质单一、特异性强 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能产生抗体又能大量繁殖 特点：特异性强灵敏度高可大量制备 注射抗原 免疫 BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 √ 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。 单克隆抗体制备过程 4、单抗隆抗体的应用 ①作为诊断试剂 ②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。 ③用于治疗疾病和运载药物 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。 单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。 ⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高 生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物 ②疗效高、毒副作用小 结合同位素的单抗 -----生物导弹 -----生物导弹 单抗 放射性同位素 专题２ 细胞工程 2.２ 动物细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 学习目标 1、掌握动物细胞融合与植物体细胞杂 交的区别与联系。 2、简述动物细胞融合和单克隆抗体制 备的过程。 3、了解单克隆抗体在医学实践中的应 用，并能说出应用实例。 自学指导 怎样才能顺利达到上述目标？要靠大家紧张有效的自学。请同学们认真阅读教材P52-54，思考下列问题，8分钟后进行检测。比一比，看谁知识掌握得最牢固. 1、动物细胞融合的概念是什么？ 2、动物细胞融合的原理是什么？诱导动物 细胞融合的方法有哪些？ 3、抗体是由何种细胞产生的？ 4、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗 体吗？ 5、融合后培养液中有几种细胞？ 6、怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有 何优点？ 先学 （一）学生认真阅读教材P52—54，独立完成上述思考题（教师巡视，保证每位学生都集中精力)(时间8分钟） （二）提问：随机点名学生回答，如有错误， 教师引导其他学生更正、讨论。 （三）检测、板演 1.出示检测题 2.让三名学生板演，其他学生做到笔记本上，教师巡视，搜集检测中出现的错误。 1.动物细胞工程技术的基础是：（　　） A．动物细胞融合 B．胚胎移植 C．动物细胞培养 D．核移植 ２．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（　　） A．结果是相同的 B．杂种细胞的形成过程基本相同 C．操作过程中酶的作用相同 D．诱导融合的手段相同 C B 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （　 ）　 A.容易产生各种变异 B．具有更强的全能性 C.取材十分方便 　　 D．分裂增殖的能力强 4、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） 　A.