毛细管电泳06.pptVIP

Capillary Iso-Electric Focusing (CIEF) 毛细管等电聚焦 Capillary Iso-Electric Focusing-CIEF 高分辨率（分辨率可达0.005 pH） 快速 微量 在柱检测 CIEF 中的谱带移动 正极移动：在正极加电解质如NaCl，使聚焦后分离的谱带向该极移动 负极移动：在负极，加电解质如NaCl，使聚焦后分离的谱带向该极移动 压力移动，加电压的同时施加压力，实现移动的同时保持聚焦状态 扫描检测分离谱带，无需谱带移动 CIEF试验要点 内壁经处理的毛细管 两性电解质（～1％）和样品充入毛细管 电极液－20 mM 磷酸为阳极液，20 mM NaOH为阴极液 加电压聚焦，4～6kV，聚焦稳态后电流下降到起始的10～25％ 聚焦区带的转移和检测 * * 等电点，pI 正负电荷相等时对应的pH 两性离子 细胞色素C 10.6　　　 胰蛋白酶原 9.2 鲸肌红蛋白 7.6 马肌红蛋白 6.6 Beta-乳球蛋白 5.2 转铁蛋白 4.3 pI＝7的蛋白质在不同pH处的荷电情况 等电聚焦的原理 具有一定pI的蛋白在电场中建立的pH梯度介质中，当所处位置的pH低于pI时带正电荷，向负极移动；在高于pI的pH位置时带负电，向正极移动；在等于pI处不动。不同等电点组分被聚焦在不同位置而达到聚焦和分离的目的