微生物实验.培养基的制备和消毒灭菌.ppt

实验五、培养基的制备和消毒灭菌 一、实验目的 1.学习掌握配制培养基的一般方法、步骤。 2.掌握干热灭菌、高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌的原理、条件和应用范围。 二、实验原理 （一）、培养基的配制 1.培养基：人工配制的供微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的营养基质。 2.培养基的配制原则 （1）目的明确：不同微生物所需营养基质不同，配制培养基的目的也有不同。 （2）营养协调：营养成分的比例和浓度要适当。 （3）理化适宜：渗透压、pH和氧化还原电位。 （4）经济节约。 （二）、灭菌方法及原理 1.高温灭菌（有干热和湿热两种） 高温使得细胞内蛋白质变性达到灭菌目的。 （1）干热：160-170℃，1.5-2h，适合玻璃、金属等器具的灭菌； （2）湿热：121.3 ℃，15-20min或115 ℃，35min，用途广泛。 2.紫外杀菌 （1）紫外线处理，使得细胞产生TT二聚体，干扰DNA复制。电离过程中产生的O3和H2O2均有杀菌作用。 （2）用于接种箱、空气及物体表面灭菌。 三、实验材料 1.药品和试剂 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、琼脂粉、NaCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、MgSO4、FeSO4、孟加拉红、1mol/L NaOH溶液。 2.器材 （1）培养基配制所需器材 试管、烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、铁架台、漏斗、天平、牛角匙、高压锅、微波炉、pH试纸（5.5-9.0）、棉花、纱布、线绳、聚丙烯袋等。 3.灭菌所需材料和器材 培养基、无菌水（试管+三角瓶）、培养皿、移液管、高压蒸汽灭菌锅、电热鼓风干燥箱、紫外线灯等。 四、实验步骤---斜面培养基的制备和灭菌 计算→称量→加热溶化→调pH →过滤（可省略）→分装→加塞（附棉塞制作）→包扎(皮筋或绳子)→灭菌→摆斜面→无菌检查。 1.称量按照配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状药品（如牛肉膏），应用烧杯和玻璃棒称量。 2.配制 （1）向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。 （2）如果配制固体培养基，在琼脂熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。一般要求琼脂沸腾3次，完全熔化后，补足所失水分。 3.调节pH值 培养基溶解后，用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1M HCl和1M NaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。 4.过滤用滤纸或多层纱布，无特殊要求时可省去。 5.分装 （1）将培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 （2）分装量①斜面：装量为管长的1/5。②液体培养基：装量为管长的1/4。 ③半固体培养基：装载量为管长的1/3。 （3）注意 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。 五、附：培养基配方和灭菌方法 （一）、培养基配方 1.牛肉膏蛋白胨培养基（ g/L,培养细菌用） 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g（取18g） 半固体取10g，液体不加 水 1000ml pH 7.0-7.2 121℃灭菌20min 2.高氏1号（g/L,培养放线菌用） 可溶性淀粉 20g KNO3 1g NaCl 0.5g K2HPO4 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 琼脂 15-20g（取18g） 水 1000ml pH 7.2-7.4 121℃灭菌20min 3.马丁氏培养基（g/L,分离真菌用） 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g KH2PO4 1g MgSO4 0.5g 1/3000 孟加拉红 100ml(???) 琼脂 15-20g（