实验10-PCR反应分析.pptVIP

聚合酶链式反应（PCR） 掌握PCR的基本原理； 了解PCR的基本操作技术 一、实验目的 实验安排： 1、PCR实验操作。 2、实验原理。 3、制作检测电泳凝胶：1%TAE琼脂糖凝胶。 4、检测实验结果。 1、PCR反应混合液的制备（25 μl 实验体系） DNA模板（20ng/ μl） 1μl 10x Taq PCR buffer 2.5 μl dNTP（10mM） 0.5μl 引物 FP（10 μM） 0.5μl 引物 RP（10 μM） 0.5μl Taq 酶（5U/μl） 0.5μl ddH2O 19.5μl (补齐到25 μl ) 混匀，放入PCR仪中开始反应 PCR实验操作（所有操作均在冰上进行） 本实验中，已预制除模板外的其他反应体系混合液（mix），每小组取48 μl mix平均分成2份：一份加1μl DNA质粒模板，另一份加1μl ddH2O，用移液器轻轻吹吸几次混匀，置mini离心机上瞬离，做好标记后置于PCR仪中扩增。 （注意：所有操作均在冰上进行！！） 每组的模板和水非一次性，要回收给下一班用 2、PCR反应程序设计如下 94 ℃，预变性5min 94 ℃，变性30s 55