shRNA靶向沉默HSV―2 UL54基因在HEK293细胞内的表达.docVIP

shRNA靶向沉默HSV―2 UL54基因在HEK293细胞内的表达 　　摘要：根据乙型单纯疱疹病毒（HSV-2）UL54基因序列，设计并合成特异性的小干扰片段，将其定向克隆至真核表达载体pGPU6/GFP/Neo中，经脂质体介导转染HEK293细胞，倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率，MTT法检测HEK293细胞的存活率，RT-PCR检测UL54基因mRNA的表达，Western blot检测UL54基因编码蛋白质的表达，终点滴定法测定细胞上清液中的病毒感染滴度。结果显示， shRNA1081能抑制UL54 基因mRNA和蛋白质的表达，能显著降低子代病毒滴度，提高细胞的存活率。表明本研究构建的重组表达载体pGPU6/GFP/Neo-UL54 shRNA能在HEK293细胞中表达，并抑制HSV-2复制。 　　关键词：UL54基因；RNA干扰；短发夹RNA；真核表达载体；2型单纯疱疹病毒 　　中图分类号：R373 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）15-3779-05 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.15.052 　　Abstract： In search of new anti-virus strategy，targeting herpes simplex virus type 2 （HS