菌种的使用和管理案例.ppt

菌种的使用过程 —菌种的采购 所有接收的菌种应保证其传代代数 （药典要求使用时不能超过5代） 菌种的使用过程 —菌种的接收和储存 菌种接收时应对以下项目进行检查: 包装完整性 菌种名称 菌种编码 批号 效期 菌种的储存 严格按照说明书的要求进行储藏。 所有过程均需要有相应的记录， 无记录表示无任何活动！ 菌种的使用过程 —冻干菌种的恢复 冻干菌种的恢复（原始菌种或叫0代菌种） 冻干菌种处于一种深度休眠状态，生理特性受到抑制，代谢处于较低状态，必须经过恢复后才能使用，即将冻干菌种溶解后将其接种于新鲜的营养培养基上，在一定的温度下培养一段时间。 冻干菌种的恢复一般情况下按照说明书的要求进行，如无说明可以参考以下进行： 细菌类/酵母类： 菌种管外表面消毒（75%酒精）打开，吸取0.3-0.4m营养肉汤溶解后全部吸出，加入适量营养肉汤培养（细菌30-35℃18-24h；酵母菌20-25℃24-48h） 霉菌: 打开后，加入适量的无菌水溶解后全部吸出，加入适量的无菌水于20-25℃恢复2-12小时，将菌悬液接种几个改良马丁琼脂斜面上（一般用三角瓶，生长的孢子较多）， 于20-25℃7-14天，用含有0.05％吐温80氯化钠胨水洗刷到其他无菌试管中。 菌种的使用过程 —非冻干菌种的恢复 申请 申请 非冻干菌种的恢复 接种斜面----适用于短期保藏，一般细菌为3个月；真菌为4个月。 如果为第一代的菌种，参考冻干菌种进行恢复后制备储备管进行冷冻保藏。（或仅接种斜面进行传代）。 菌种恢复 干菌种(安瓿)的开启： 菌种的使用过程 —菌悬液的制备 申请 申请 菌悬液的制备 菌液的制备：细菌和酵母菌用氯化钠蛋白胨水进行稀释；霉菌用0.8％生理盐水稀释） 标识（唯一性，可以追溯） 效期：按照药典要求，菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用，若保存在2～8℃可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 各实验室可以根据自身操作习惯总结出一套切实可行、快速稳定的菌液制备标准程序。 菌种的使用 申请 申请 质量控制 质量控制贯穿于整个传代过程，只要有传代发生，则必须有质量控 制过程。 所有的过程均需要有记录。 菌种编码 编码必须具有唯一性，且可以追溯。例如： 冻干菌种编码ATCC8739/01----ATCC8739表示菌种编码；01表示接收的第一支。 菌悬液编码D8739/01/18/1-5---5代表稀释度示2009年5月1日制备。 文件和记录 申请 申请 文件 需要有详细的贴合实际的SOP，但必须保证符合相应法规要求。 记录 菌种的接收、储存、领用及复苏记录 工作菌悬液的配制、储存、稀释及领用记录 * * * * 菌种的使用和管理 内容提要： 菌种的质量控制和鉴定 菌种保藏 菌种的使用过程 文件及记录 菌种保藏意义 目的：保证检验中有准备好的菌悬液可以使用。 一般需要使用菌悬液的试验如下： 防腐剂效能试验 方法验证 培养基质量控制 鉴别系统的质量控制 阳性对照 菌种保藏 药品微生物检验常用标准菌株 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis [CMCC（B）63 501] 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus [CMCC（B）26 003] 生孢梭菌 Clostridium sporogenes [CMCC（B）64 941] 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa [CMCC（B）10 104] 大肠埃希菌 Escherichia coli [CMCC（B）44 102] 白色念珠菌 Candida albicans [CMCC（F）98 001] 黑曲霉 Aspergillus niger [CMCC（F）98 003] 菌种保藏 样品分离菌库 环境监控菌库 标准菌种菌库 CMCC —— 中国医学菌种保藏中心 CMCC（F）或 CMCC（B） B — 代表细菌、F —代表真菌 ATCC ——美国标准菌种收藏所 著名的微生物保藏中心，创立于1899年，设在美国马里兰州罗克维尔市。收藏有