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青霉素生产工艺 山东农业大学 生命科学学院 2008级生物工程三班 孙启星 摘要 青霉是产生青霉素的重要菌种。广泛分布于空气、土壤和各种物上，常生长在腐烂的柑桔皮上呈青绿色。青霉素的发现和大规模地生产、应用，不仅对抗生素工业的发展起了巨大的推动作用，而且防治了各种疾病，延长了人类的平均寿命。因此，青霉素的生产受到了各国关注。青霉素的发酵工艺与设备也在不断地创新发展。 关键词：青霉素 发酵 引言 发酵的成功不仅取决于技术，而且与设备密切相关，本文注重从发酵角度分析青霉素生产工艺，。 正文： 1.孢子的制备: 这是发酵工序的开端，是一个重要环节。抗生素产量和成品质量同菌种性能以及同孢子和种子的情况有密切关系。生产用的孢子需经过纯种和生产能力的检验，符合规定的才能用来制备种子 。 保藏在砂土管或冷冻管中的菌种，在接入种子罐以前，需经过扩大繁殖才能获得接种所需要的孢子数。扩大繁殖的方法有两种： ①孢子进罐法： 在培养基上生长繁殖成大量的孢子，此法是目前生产抗生素孢子常用的方法。 优点：工艺过程简单，并且一次可以制备大量的孢子，易于保存，不易染菌。 缺点：砂土管或冷冻管用量太大。 ②摇瓶菌丝进罐法： 即先将固体培养基上繁殖的孢子接入摇瓶液体培养基中，使其生长繁殖成菌丝，再转入种子罐内，此法适用于生长发育缓慢的放线菌。 优点：可以节约砂土管或冷冻管用量。 缺点：菌丝不宜保藏，批号更换频繁，批与批之间的差异容易造成生产上的波动；孢子制备工艺时间拖长，容易染菌。 2.种子的制备: 使孢子发芽、繁殖和获得足够数量的菌丝，以便接种到发酵罐当中去。种子制备从摇瓶培养开始，再接入种子罐进行逐级扩大培养。 孢子瓶中的孢子（或摇瓶菌丝）被接入到体积较小的种子罐中，经过培养后孢子即发芽繁殖成大量的菌丝，然后接入到体积较大的种子罐内，经过培养繁殖成更多的菌丝，然后再转入发酵罐内进行抗生素的生物合成。 3.灭菌 发酵开始前，有关设备和培养基必须先经过灭菌，后接入种子。 工业上常用的方法有：干热灭菌、湿热灭菌、化学药剂灭菌、射线灭菌和介质过滤除菌等几种。在实际的青霉素生产中采用了湿热蒸汽灭菌中的“实罐灭菌（即分批灭菌）法”和连续灭菌。 ①实罐灭菌 各路进气要畅通，防止短路逆流，罐内液体翻动要激烈；各路排汽也要畅通，但排汽量不宜过大，以节约用气量。在保温阶段，凡进口在培养基液面以下的各管道及冲视镜管都应进汽；凡开口在液面之上者均应排汽。无论与罐连通的管路如何配制，在实消时均应遵循“不进则出”的原则。在引入无菌空气前，应注意罐压必须低于过滤器压力，否则物料将倒流入过滤器内。 ②连续灭菌 灭菌的基本设备一般包括 （1）配料预热罐，将配好的料液预热到60~70℃，以避免灭菌时由于料液与蒸汽温度相差过大而产生水汽撞击声； （2）连消塔，连消塔的作用主要是使高温蒸汽与料液迅速接触混合，并使料液的温度很快升高到灭菌温度（126~132℃）； （3）维持罐，连消塔加热的时间很短，光靠这段时间的灭菌是不够的； （4）冷却管，从维持罐出来的料液要经过冷却管进行冷却，生产上一般采用冷水喷淋冷却，冷却到40~50℃后，输送到预先已经灭菌过的罐内。 发酵罐 1. 特点： 1）.结构上具有适宜的径高比。发酵罐的高度与径高比一般为1.7~4，罐身越长，氧气的利用率越高。 2）.有一定的刚度与强度，由于发酵罐在灭菌过程和工作时，罐内有一定的压力和温度。因此需要一定的强度。 3）.搅拌通风装置使之气液充分混合，保证发酵液一定的溶解氧。 4）.足够的冷却面积。 5）.尽量减少死角。 6）.轴封严密。 7）.维修操作检测方便 2. 结构 好气性机械搅拌发酵罐是密闭式受压设备，主要部件包括罐身、搅拌器、轴封、打泡器、中间轴承、空气吹管（或空气喷射管），挡板、冷却装置、人孔等 ①搅拌装置 在发酵罐内设置机械搅拌有利于液体本身的混合和气－液及液－固间的混合，以及质量和热量的传递，特别对氧的溶解具有重要的意义，因为它可以加强气－液间的湍动，增加气－液接触面积和延长气－液接触时间。 ②消沫装置 内置：防止泡沫外溢，它是在搅拌轴或罐顶另外引入的轴（指搅拌轴由罐底伸入时）上装上消沫桨。 另一类置于罐外，目的是从排气中分离已溢出的泡沫使之破碎后将液体部分返回罐内。 最简单的是桨式消沫桨。 4.发酵 这一过程的目的主要是为了使微生物分泌大量的抗生素。发酵开始前，有关设备和培养基必须先经过灭菌，后接入种子。接种量一般为5～20%。发酵周期一般为4～5天，但也有少于24小时，或长达二周以上的。在整个过程中，需要不断通气和搅拌，维持一定的罐温和罐压，并隔一段时间取样进行生化分析和无菌试验，观察代谢变化、抗生素产生情况和有无杂菌污染 1）碳源控制 采用连续添加葡萄糖的方法。 苯乙酸