第一章核酸概述-分子生物学分析.ppt

一 核酸 二核酸的化学成分 三 核酸的理化性质 四 DNA的一级结构 五 DNA的二级结构 六 DNA的高级结构 七基因与基因组 一 核酸 ＊1925－1930年，Levene确定核酸是由4种核苷酸组成；Chargaff发现四种核苷酸并不是简单的1：1的关系。 ＊转化实验 1928年，Griffith等人肺炎双球菌实验（图1－1）； 1944年，Avery提出转化因子是DNA（图1－2）。 2 核酸的分类与分布 二 核酸的化学成分 ＊沉降速度： RNA 环状DNA 开环、线状DNA ＊核酸的紫外吸收 碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波 段有强烈的光吸收，λmax=260nm 1 OD260dsDNA=50μg/ml 1 OD260ssDNA=33μg/ml 1 OD260 RNA=40μg/ml 纯DNA A260/A280=1.8 纯RNA A260/A280=2.0 ＊核酸的酸解和碱解 DNA和RNA对酸或碱的耐受程度有很大差别 ＊酶水解 核酸水解酶:水解磷酸二酯键。 DNA水解酶（DNases）:以DNA为底物 RNA水解酶（RNases）:以RNA为底物的。 核酸外切酶:从一端（3′-端或5′-端）开始 核酸内切酶:从中间开始 四 DNA的一级结构 1 、DNA的一级结构 1）DNA结构的特点： 2）DNA分子的多样性 五 DNA的二级结构 1、 DNA二级结构特征 2、DNA双螺旋的稳定性 氢键 疏水作用 碱基堆积力 离子 3、 DNA结构的多态性 目前已知DNA双螺旋结构可分为A、B、C、D及Z型等数种，除Z型为左手双螺旋外，其余均为右手双螺旋。 DNA结构类型和螺旋参数 Z型:在DNA单链中存在嘌呤与嘧啶（CGCGCG或CACACA）交替排列的顺序时，就会出现左手双螺旋结构。在主链中各个磷酸根呈锯齿状排列，犹如“之”字形一样，因此叫做Z型沟象。 3）Z型DNA与生物的基因调控有关 B 远距离调控 六 DNA超螺旋结构 超螺旋结构是DNA分子高级结构的主要形式。可分为正超螺旋和负超螺旋两类。 1、超螺旋特点 七 核小体与染色体 1、 核小体 DNA双螺旋链，等距离缠绕组蛋白（见表2-5）（H2A、H2B、H3、H4）各二分子，组成八聚体，形成众多核心颗粒，外绕1.75圈左右的DNA链，每圈约85bpDNA，各颗粒之间为带有H1组蛋白的连接区DNA。 其他非组蛋白： HMC蛋白； DNA结合蛋白； A24非组蛋白. 八、基因与基因组 1、基因 类型 2、基因组 3、 原核生物基因组 ＊读框不同 4 、真核生物基因组 C 重复序列（序列组分） 快复性成分 高度重复序列 中复性成分 中度重复序列 慢复性成分 不重复序列 高度重复序列：重复频率高，复性速度很快 ，在基因组中所占比例随种属而异。常被称为卫星DNA。 中度重复序列 不重复序列 E 单顺反子 ▲ 假基因或自私基因 ＊基因组很小，且大小相差较大 ＊单倍体（逆转录病毒除外） ＊基因重叠 ＊结构简练 ＊转录单元（多顺反子结构） ＊基因多是连续的（真核细胞病毒除外） 基因组大小 编码蛋白质 乙肝病毒 3Kb 4种 痘病毒 3000Kb 几百种 大肠杆菌 4600Kb 3000－4000 ΦX174：单链DNA病毒 编码11个蛋白质分子，总分子量为25万左右，相当于6078个核苷酸所容纳的信息量，但其DNA本身只有5375个核苷酸，最多能编码总分子量为20万的蛋白质分子，为解决这一矛盾，出现了基因重叠。 基因重叠的几种情况： （1）完全重叠 （2）部分重叠 （3）两个基因只有一个碱基重叠 一个基因终止密码子的最后一个碱基是另一个基因起始密码子的第一个碱基 5’……GAAGGAGUGAUGUAAUGUCUAAAGGU……3’ 5’……GAAGGAGUGAUGUAA……3’ Glu Gly Val Met Sto