5.感受态细胞制备和转化.pptVIP

感受态细胞制备Preparation of competent cell 实验原理 受体细胞经过一些特殊方法(如电击法、CaCl2、RbCl等化学试剂法)的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Compenent cells)。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（Transformant，即带有异源DNA分子的受体细胞）。 实验材料和试剂 实验材料：E. coli DH5α菌(R-，M-，Amp-)。 实验试剂： LB液体培养基：称取蛋白胨(Tryptone)10 g，酵母提取物(Yeast extract) 5 g，NaCl 10 g，溶于800ml去离子水中，用 NaOH 调pH至7.5，加去离子水至总体积1L，高压下蒸气灭菌20min。 LB固体培养基：液体培养基中每升加12g琼脂粉，高压灭菌。 0.05mol/L CaCl2溶液：称取0.28g CaCl2(无水,分析纯)，溶于50mL重蒸水中，定容至100mL，高压灭菌。 实验仪器 实验步骤 菌体的培养 受体菌的培养从 LB 平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落，接种于3-5mL LB液体培养基中，37℃下振荡培养 12h 左