第三章基因工程制药567节139312568分解.ppt

2、连续培养 将种子接入发酵反应器中，搅拌培养至一定菌体浓度后，开动进料和出料的蠕动泵，以控制一定的稀释率进行不间断的培养。 3、透析培养 利用膜的半透性原理使代谢产物和培养基分离，通过去除培养液中的代谢产物来解除其对生产菌的不利影响。 传统生产外源蛋白的发酵方法，由于乙酸等代谢副产物的过高积累而限制工程菌的生长及外源基因的表达，而透析培养解决了上述问题。 4、固定化培养 有利于提高质粒的稳定性，便于进行连续培养，特别是对于分泌型菌更为有利。 二、基因工程菌的发酵工艺 基因工程菌的发酵与传统的微生物发酵不同,基因工程菌带外源基因,发酵的目的是使外源基因高效表达。它不仅涉及宿主载体和克隆基因之间的相互关系还和环境有关。 工艺要求： 外源基因既高效表达，又有利于产品分离纯化。 影响发酵的主要因素： ⒈ 培养基成分的影响 ⒉ 接种量的影响 ⒊ 温度的影响 ⒋ 溶解氧的影响 ⒌ 诱导时机的影响 ⒍ pH的影响 ⒈ 培养基的影响 培养基的组成既要提高工程菌的生长速率，又要保持工程菌的稳定性，使外源基因高效表达。常用的碳源有：葡萄糖、甘油、乳糖、甘露糖、果糖等。常用的氮源有：酵母提取物、蛋白胨、酪蛋白、玉米浆、氨水、硫酸铵、硝酸铵、氯化铵等。还有无机盐、微量元素、维生素、生物素等。对营养缺陷型菌株还要补加相应的营养物质。 不同的碳源对菌体的生长和外源基因表达有较大的影响。使用葡萄糖和甘