IMP3在不同宫颈组织中的表达及其与微血管密度的相关性.docVIP

IMP3在不同宫颈组织中的表达及其与微血管密度的相关性 　　[摘要] 目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3（IMP3）的表达及微血管密度（MVD）与宫颈鳞癌发生发展及预后的相关性。 方法 选取2007年7月～2013年1月于连云港市妇幼保健院进行宫颈活检或手术切除的宫颈组织标本存档蜡块100例，其中宫颈浸润癌50例，宫颈上皮内瘤变35例，宫颈炎15例。采用免疫组化S-P法分别检测IMP3与MVD在各宫颈组织中的表达。 结果 IMP3的表达及MVD在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变、正常宫颈组织中两两比较，差异均有高度统计学意义（P 0.01）；宫颈鳞癌组织中IMP3及MVD呈高表达，并且与宫颈鳞癌临床分期、浸润深度、淋巴转移、分化程度相关，差异均有统计学意义（P 0.05或P 0.01）。IMP3在宫颈癌组织中的阳性表达率与MVD值呈正相关（r = 0.323，P 0.05）。 结论 IMP3及MVD与宫颈癌的发生及侵袭转移有关，可以作为判断宫颈上皮内瘤变发展为浸润癌风险指标和判断宫颈鳞癌恶性程度和预后的良好指标。 　　[关键词] 宫颈上皮内瘤变；宫颈鳞癌；IMP3；MVD；免疫组化 　　[中图分类号] R767.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）09（b）-0025-04 　　宫颈癌是严重威胁妇女健康的常见恶性肿瘤，发病率逐年上升并呈低龄化趋势，早发现、早诊断、早治疗是防治宫颈癌的关键[1]。临床研究表明，从宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）、到宫颈原位癌、浸润癌是逐渐递进的病变恶化过程，约22%CIN Ⅲ进展为浸润癌[2]，因此对于CIN进展进行预测十分重要。研究表明，胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3（insulin-like growth factor-ⅡmRNA-binding protein 3，IMP3）是一个癌胚蛋白，表达于胰腺癌，胃癌、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤组织中，并和其生物学行为相关，且该基因表达量的改变还可以作为监测肿瘤恶性行为的发展趋势 ，证实IMP3在肿瘤的发生发展中起了非常重要的作用，尤其是在肿瘤细胞的增殖和转移中起着更重要的作用。对于肿瘤筛查、早期诊断、预后的判断有意义[3-6]。 　　微血管密度（microvessel density，MVD）测定技术为目前评价肿瘤血管生成的金标准，已经被作为一个有意义而且独立的预后指标应用于临床，与肿瘤的侵袭性远处转移及肿瘤的分级有关[7]。本课题通过研究不同宫颈组织中IMP3蛋白和MVD的变化，探索二者在宫颈癌的发生发展中的作用及其临床意义，为宫颈癌的早期诊断及预后判断提供新指标。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取2007年7月～2013年1月于连云港市妇幼保健院进行宫颈活检或手术切除标本存档蜡块100例，患者年龄19～73岁，术前均未行放疗或者化疗。其中宫颈鳞癌50例，CIN 35例，宫颈炎15例。宫颈鳞癌中，高分化16例，中分化17例，低分化17例；宫颈鳞癌分期（FIGO 2009）I期37例，Ⅱa期13例，CINⅠ11例、CIN Ⅱ12例、CIN Ⅲ12例。本研究经连云港市妇幼保健院医学伦理委员会讨论后批准，参与研究者均知情同意并签署知情同意书。 　　1.2 主要试剂 　　鼠抗人IMP3单克隆抗体（工作浓度1∶200）购自武汉博士德公司；CD34抗体（即用型）及其余试剂盒均购自福州迈新生物有限公司。 　　1.3 染色方法 　　采用免疫组织化学S-P法，操作步骤按试剂盒说明书进行，抗原修复采用高压锅高温修复，用已知乳腺阳性切片做阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。具体步骤如下：切片，烤片，脱蜡，酒精梯度，自来水洗，纯净水洗1 min；高压锅加入柠檬酸缓冲液，烧沸（240℃），置入切片，压力阀顶起后加热3～5 min，熄火后自然冷却3～5 min，自来水冲洗冷却5 min（至锅底冷却）；取出切片，自来水洗，纯净水洗1 min；擦干玻片，画圈，适当干燥后PBS冲洗（去垢剂）2 min×3次；擦干玻片，H2O2封闭（覆盖标本）10 min，PBS冲洗2 min×3次；加一抗，37℃温箱1 h后4℃冰箱过夜，PBS冲洗2 min×3次；即用型二抗10～15 min，PBS冲洗2 min×3次；DAB显液（现配），镜下观察（约2 min），水洗终止；苏木精染色1 min，分化、返蓝、梯度酒精、封片；苏木精复染1～2 min，自来水冲洗干净，分别依次采用80%、95%无水乙醇的梯度脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。 　　1.4 结果判定 　　IMP3基因结果判定：IMP3基