CD90在增生性瘢痕中的表达及其生物学作用研究.docVIP

CD90在增生性瘢痕中的表达及其生物学作用研究 【摘要】 目的 探讨CD90在增生性瘢痕的形成过程中所起的生物学作用。方法 20例带有正常皮肤组织的瘢痕为手术切除后的标本， 经过严格固定、石蜡包埋、组织切片、HE染色后， 分为增生性瘢痕组（A组）、瘢痕交界处组（B组）及正常皮肤组（C组）， 每组20例。从每例标本中选取1个典型部分进行采样， 构建包括60个典型组织标本的芯片蜡块， 从该蜡块中切取1张切片， 免疫组化染色， 检测CD90在A、B、C组中的表达水平， 将所得结果进行统计分析。结果 CD90 的阳性表达在A组与B组中均较高， 两组相比差异无统计学意义（P 0.05）， 而在C组中阳性表达较低， 与上述两组相比差异具有统计学意义（P 0.05）。结论 在增生性瘢痕中， CD90阳性表达的成纤维细胞与瘢痕异常增生存在相关性。 【关键词】 增生性瘢痕；CD90；免疫组化 DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.29.018 增生性瘢痕是因创伤后胶原纤维等细胞外基质过度生长、无序沉积所致。CD90作为粘附分子家族成员， 在成纤维细胞的粘附、凋亡、细胞增殖等方面通过信号传导发挥作用， 与创面愈合和纤维化疾病关系密切[1]。本实验应用免疫组化结合组织芯片技术方法， 检测成纤维细胞CD90在增生性瘢痕、瘢痕交界处、周围正常皮肤组织中的阳性表达情况， 为增生性瘢痕的临床防治提供新的思路和实验依据， 现报告如下。 1 材料与方法 1. 1 标本来源 20例标本均来自本院外科手术切除的瘢痕组织， 用福尔马林溶液进行严格固定， 然后常规石蜡包埋， 切片经过HE染色检测证实临床诊断后， 分为正常皮肤组、瘢痕交界处组、增生性瘢痕组， 每组20例。所选标本都符合以下实验标准[2]：①病变未超过损伤范围；②病程中瘢痕组织具有持续性生长、表面发红、疼痛及瘙痒等临床症状；③未经过口服激素药物、冷冻、激光等非手术治疗；④供者无遗传性疾病及全身系统性疾病。 1. 2 试剂来源及染色方法 鼠抗人CD90单克隆抗体、SP通用型免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程公司）。将新鲜的组织标本用10%中性甲醛固定， 制成3 μm厚度石蜡切片后HE染色。根据染色结果， 通过观察组织标本中成纤维细胞的分布特征及胶原含量情况， 进行实验分组。分成增生性瘢痕组（A组）、瘢痕交界处组（B组）、正常皮肤组（C组）。选取三组组织蜡块的标本， 根据标本HE切片染色及形态学观察结果确定其典型病变部位， 从每例标本中选取1个典型部分进行采样， 构建包括60个典型组织标本的芯片蜡块， 阵列均为10×6。将组织芯片蜡块切片， 制成3 μm厚度。 1. 3 观察方法 通过观察组织切片中成纤维细胞CD90的表达情况， CD90以细胞膜及胞浆内呈现棕黄色颗粒为阳性， 由两名高年资病理科医师在光学显微镜下观察并照相， 评估其免疫组化结果。 1. 4 评分标准 在400倍光镜下随机观察5个视野， 每张切片由2名观察者双盲交换判断， 采用半定量记分法， 根据细胞膜或细胞浆的染色强度及染色细胞百分比进行综合评分[3]。阳性细胞数评分标准： 50%为3分；26%～50%为2分；≤25%为1分；无细胞染色记为0分， 染色强度评分：3分为棕褐色；2分为棕黄色；1分为浅黄色；0分为无色。结合每张切片染色程度和阳性细胞数百分比进行综合评分， 两者相加为其最后得分：判定0～2分为阴性， 3～6分为阳性。 1. 5 统计学方法 采用SPSS11.0统计学软件进行数据分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P 0.05表示差异有统计学意义。 2 结果 20例标本中， A组有13例可以观测到有少量CD90阳性表达的成纤维细胞分布在管周， 真皮中CD90阳性表达的成纤维细胞相对较多， 且体积肥大， C组中CD90阳性表达的成纤维细胞相对较少， 且体积也较小。B组中CD90的阳性表达（50.00%）介于A组（61.11%）与C组（16.67%）之间。A组与B组相比差异无统计学意义（P 0.05）， A组与C组相比差异有统计学意义（P 0.05）。 3 讨论 CD90是最小的免疫球蛋白超家族成员， 一般都贴附在细胞膜的胞浆面， 它作为一种细胞的粘附结构， 是细胞与细胞之间， 细胞和细胞外基质之间相互作用的重要调节结构 [1]。本实验结果发现成纤维细胞CD90阳性的表达情况， 在A组中表达最高， 而在B组及其C组中表达量依次递减， 这说明CD90在增生性瘢痕成纤维细胞中表达明显， 而且与瘢痕形成密切相关。 为了减少实验误差， 本实验中作者采用组织芯片技术检测成纤维细胞CD90的阳性表达情况， 发现成纤维细胞CD90在A组与B组中的阳性表达均较高， 两组相比差异无统计学意义（P 0.05）， 而在