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登革热病毒的分子诊断方法 TaqMan MGB 实时荧光 RT-PCR快速检测法 登革热简介 登革热，又名骨痛热，是登革热病毒引起、依蚊传播的一种急性传染病。 本病于1779年在埃及开罗、印度尼西亚雅加达及美国费城发现，并据症状命名为关节热和骨折热。1869年由英国伦敦皇家内科学会命名为登革热。 登革热症状 1、发热 2、全身毒血症状 3、皮疹 4、出血 5、淋巴结肿大 登革热的特点 特点： 1、地方性 2、季节性 3、突然性 4、传播迅速，发病率高，病死率低，疫情常由一地向四周蔓延。 登革热的历史 1779年于开罗发生，于巴达维亚（今雅加达）发生 1873年于台湾澎湖县发生 1987-1990南台湾大爆发 1978年5月2日广东佛山石湾镇发现首例病人。 1999年夏季福州市近郊发生登革热流行 2004年福州市台江、连江、闽侯发生局部流行 2001-2006年广东省共报告登革热本地病例2 897例。 登革热的分布现状 全球每年约有五千万宗登革热个案，常见于热带和亚热带地域。　 登革热病毒 登革病毒基因组结构 传播登革病毒的虫媒 埃及伊蚊（Ae.aegypti) 分子诊断方法 1、TaqMan MGB 实时荧光RT-PCR法 2、核酸杂交技术 3、RT-NEST-PCR 4、多重PCR TaqMan MGB 实时荧光RT-PCR法 目前最主要采用的对登革热病毒的快速检测方法。 该方法在2009年成为中国出入境检验检疫行业标准。(SN/T 2301-2009) 技术背景 是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。 于1996年由美国Applied biosystems公司推出，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA(orcDNA)的起始浓度进行定量的方法。 是目前确定样品中DNA(或cDNA)拷贝数最敏感、最准确的方法。 引物和探针 FAM：荧光报告基团 MGB：荧光淬灭基团 技术原理 技术原理 技术优点 1、特异性更强 2、能有效解决PCR污染问题 3、自动化程度高 4、可实现荧光信号的积累与PCR产物形成完全同步，可以实时监控RT-PCR过程。 应用领域 目前该技术主要应用在检测登革热病毒、口蹄疫病毒、马秋波病毒、禽呼肠孤病毒等方面。 展望 1、多重RT-PCR的改进 2、RT-NEST-PCR的改进 3、探针的改进和新探针的发现 * * 2010级生物化学与分子生物学系 刘轩 21620101152316 白纹伊蚊(Ae.albopictus) Den-FP： Den-RP： Den-Probe： 学习动物精神 11、机智应变的猴子：工作的流程有时往往是一成不变的，新人的优势在于不了解既有的做法，而能创造出新的创意与点子。一味 地接受工作的交付， 只能学到工作方法 的皮毛，能思考应 变的人，才会学到 方法的精髓。 学习动物精神 12、善解人意的海豚：常常问自己：我是主管该怎么办才能有助于更好的处理事情的方法。在工作上善解人意， 会减轻主管、共 事者的负担，也 让你更具人缘。