改过分子生物学创新实技术总结.ppt

2013年度 分子生物学创新实验 人视黄醇结合蛋白的克隆、鉴定以及原核表达 指导教师：田生礼 【目的要求】： 分子生物学创新实验综合了：DNA的分离、纯化、克隆到目的基因的鉴定、表达等一系列的分子克隆基础实验，形成一个涵盖现代分子生物学基础实验内容的整体实验。通过对实验内容整体的了解，进一步巩固有关分子生物学的相关理论知识，并较系统地学习和掌握分子生物学的基本实验方法、技术和操作技能。 技术要求：理解并熟悉分子生物学实验技术（包括DNA技术、RNA技术、蛋白质技术、杂交技术等）的基本原理方法，掌握DNA提取纯化、定量、DNA克隆、电泳等基本实验技术，重点掌握质粒DNA纯化技术、酶切技术、DNA片段回收、重组连接技术、电泳技术、转化技术、基本PCR技术以及蛋白质的诱导表达技术等。 【总技术路线图】： 大肠杆菌BL-21感受态的制备 质粒pET-32a- hRBP 转化 菌液质粒提取、质粒酶切鉴定、质粒PCR鉴定 不同时间IPTG诱导目的蛋白表达 按时间梯度取样 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的蛋白 得出结果，总结，上交实验报告 不同浓度IPTG诱导目的蛋白表达 按浓度梯度取样 所用菌种与质粒： pET-32a-hRBP、大肠杆菌BL21（DE3）（基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）） 【实验材料和用品】： 实验仪器： PCR仪、超净