链霉素生产的代谢调控.docVIP

微生物代谢调控的论文 摘要：链霉素广泛的应用于临床和农业中，但链霉素的产生菌链霉菌普遍存在遗传不稳定性，大大限制了其功能的发挥，影响了链霉素的产量。本文为提高链霉素产量，从链霉素的生物合成途径、代谢调控机制以及链霉素发酵过程中的优化控制等方面进行了综述。 郑忠巧 生物工程一班 任课教师：杜春梅 链霉素生产的代谢调控 从图1可看出，每生成1个链霉素分子都需消耗3个葡萄糖分子、7个NH3分子、2个CO2分子和1个甲硫氨酸分子。其中，有3个NH3分子是通过转氨基反应分别把氨基供体——谷氨酰氨、丙氨酸和谷氨酸的氨基结合到链霉胍上和L-葡萄糖胺的氨基上，另外4个NH3分子是通过鸟氨酸环供给的，其中2个分子又由氨甲酰磷酸酯，另外2分子由天冬氨酸引入，最后转变为精氨酸的脒基，再转移到链霉胺衍生物上。2个CO2也是通过鸟氨酸循环固定的。 在灰色链霉素的发酵过程中，与链霉素同时产生的还有甘露糖链霉素（链霉素B），其化学结构为N-甲基-L-葡萄糖胺的C4与 D-甘露糖的C4以α-糖苷键 相连接的糖苷，经过甘露糖苷酶作用，可水解为链霉素和甘露糖。 2.2 链霉素生物合成的调节机制 在链霉素生物合成中的调节机制主要有发酵阶段的转变、分解产物的调节以及无机磷的反馈抑制等方面。 2.2.1 发酵阶段的转变 催化链霉胍的2个转脒基反应的酶，在合成阶段开始时的突然出现是由于新的蛋白质的合成，而不是蛋白质的激活。 2.2.2 分解代谢产物的调节 在发酵过程中，除形成链霉素外，还形成一种支 路产物—甘露糖链霉素（mannosidostrpromyclin，又叫链霉素 B）。对大多数微生物来说，甘露糖链霉素的生物活性只有链霉素的20%~25%。直到发酵后期才产 生水解甘露糖链霉素的α-D-甘露糖苷酶，能迅速把甘露糖链霉素水解成链霉素和甘露糖，反应如下：链霉素-甘露糖 甘露糖苷酶 链霉素+甘露糖 2.2.3 无机磷的反馈抑制 正常生长所需的无机磷浓度抑制链霉素的形成。 磷酸盐与链霉素的生物合成过程有密切关系，在链霉素生物合成中有几步磷酸酯酶所催化的去磷酸化反应。过量的磷酸盐会产生反馈抑制，阻抑这几步的一个或多个磷酸酯酶的活性或形成，因而抑制链霉素的合成，因此磷酸酯酶的活力与链霉素的形成有密切关系。此外磷酸盐还能调节链霉胍合成的关键酶—脒基转移酶的形成，高浓度磷酸盐严重阻遏该酶的形成[8]。 3 链霉素生产的代谢调控 微生物的代谢调控通常通过以下方式:1.育种，选育基因突变株3.1.4 增加前提物合成 (1) 葡萄糖胺是生物合成链霉素的前体物质。有人采用诱变方法获得了细胞内葡萄糖胺含量提高了3倍的突变株，其链霉素产量比原菌株提高了一倍。 (2)精氨酸也是合成链霉素的前体物，增加菌体细胞精氨酸生物合成能力，有利于链霉素产量的提高。 (3)脒基转移酶是链霉胍合成的关键酶。有人将脒基转移酶进行了克隆，结果细胞内脒基转移酶的量得以扩增，从而增加了链霉素的前体物链霉胍的积累，造成链霉素产量的提高。 3.1.5 形态突变株 据报道，挑选洁白、丰满，呈梅花型或馒头型菌落常是获得链霉素高产菌的条件。若菌落变成光秃型或半光秃型，气生菌丝减少，颜色改变，孢子数量减少，一般说来，其链霉素的产量也大幅度降低。 3.2 基因工程育种 由于产抗生素的链霉菌遗传结构包括抗生素生物合成、抗生素抗性、氨基酸生物合成、色素生成和发育变化等方面的不稳定，大大制约了链霉菌的工业化生产。许多科研工作者将基因工程技术运用到了链霉菌育种之中，采用各种基因操作技术，使不同化合物、不同来源的基因在同一菌株中重新组合，增加代谢产物的多样性[10]。目前的基因工程技术有以下：（1）利用基因重排技术对出发菌株进行处理可以提高链霉素的产量[11]；（2）通过基因组测序分析，已经发现在链霉菌基因组中大多数情况是生物合成基因以相近的簇形式存在，单拷贝可扩增因子通过速率限制不对称交换以转换成重复结构。组建重组子的可扩增因子和重要基因的拷贝数，也可能提高基因产物的表达量[12]；（3）将生物合成基因与相应的质粒载体重组，导入特定的基因工程菌，由于质粒的高拷贝，诱导表达获得高产量的抗生素；（4）敲除负调控基因，抑制无关代谢活动可增加细胞对目标产物合成在能量和碳源上的供应，从而提高目的抗生素的产量；（5）引入血红蛋白， 链霉菌发酵过程中，充足的氧气供给是满足细胞生长代谢的重要因素。改良传统生物反应器及增大通气量的方法均对设备的要求较高，能耗较大。若能在链霉菌中导入血红蛋白基因，表达血红蛋白，就可使该细胞在贫氧状态下也能很好地生长。（6）引入抗性基因和调节基因，链霉素生物合成抗生素的过程中，抗生素耐药性基因往往存在