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法医DNA常量检材Chelex―100提取法探究 　　【摘要】目的：对Chelex-100提取法在常量检材DNA提取中的应用情况进行研究。方法：选取20份送检的常量检材，包括烟蒂、染血棉签、纱条、FTA卡片等检材，采用Chelex-100提取法对唾液、血痕进行检测，并对检测情况进行整理分析。结果：1组DAN浓度为2.31±0.2ng/μl；2组DNA浓度为2.28±0.4ng/μl；3组DNA浓度为2.49±0.3ng/μl，不同浓度的Chelex-100检测的DNA浓度比较无明显差异，且均能够达到检验目的。结论：低浓度Chelex-100在常量检材DNA提取中即可取得良好的效果，能够准确的提取DNA。 　　【关键词】常量检材；Chelex-100提取法；DNA 　　法医DNA检验技术是一种分子生物学检验方式，其主要是利用DNA的独有性和个体识别性进行亲子鉴定和嫌疑人鉴定。法医DNA检验的主要对象为生物物证，也就是人体中的细胞核基因组，其通常存在于血液、唾沫中。目前，最常用的检测方法为Chelex-100提取法，主要是由于此种检测方式成本较低、操作方便、时间较短。笔者将对Chelex-100提取法在常量检材DNA提取中的作用进行研究。 　　1.资料与方法 　　1.1一般资料 　　选取20份送检的常量检材，包括烟蒂、染血棉签、纱条、FTA卡片等检材，其中烟蒂5份、棉签5份、纱条5份、FTA卡片5份。根据Chelex-100的浓度将所有检材分为三组，浓度5%为1组；10%为2组；15%为3组。1组将5gchelex-100溶液加纯水溶解至100ul；2组将10g chelex-100加纯水溶解至100ul；2组将15g chelex-100溶液加纯水溶解至100ul。 　　1.2检测方法 　　1.2.1血液DNA检测：将适量检材放置于离心管内震荡30s，放置于温室中浸泡，而后在13，000rpm条件下进行离心震荡，留取20μl基底液，而后加入Chelex-100和PK5-20μl，在56摄氏度下放置30-90min；在100摄氏度下放置5-20分钟，最后在10，000rpm条件下离心震荡2min，取上层清液备用。 　　1.2.2唾液DNA检测：将唾液斑检材将之与离心管中，加入0.5ml纯水，混匀，温室中浸泡30min，在13，000rpm条件下离心震荡3min，去除上清液；而后加入Chelex-100和PK5-20μl，在56摄氏度下放置30-90min；在98摄氏度下放置15分钟，震荡混匀，最后在13，000rpm条件下离心震荡2min，在4摄氏度下保存。而后将所有样本进行DNA扩增、电泳处理。 　　1.3效果比较 　　对三组检测的DNA浓度进行比较。 　　1.4数据统计 　　数据采用spss17.0软件处理，计量资料采用±S表示，资料采用t值检验，P0.05认为差异具有统计学意义。 　　2.结果 　　三组DNA浓度比较无明显差异，P0.05（详见表1）。 　　表1 三组DNA浓度比较 　　组别 浓度（ng/μl） 　　1组 2.31±0.2 　　2组 2.28±0.4 　　3组 2.49±0.3 　　P值 0.12 　　t值 1.23 　　3.讨论 　　近年来由于医学科技不断的发展，DNA检测技术逐渐普及，同时DNA检测方式也越来越多，目前主要有Chelex-100提取法、有机法、二氧化硅法、碱裂解法和盐析法。Chelex-100是一种树脂，对多价金属离子具有非常高的亲和力，其在低离子强度、碱性温浴的作用下能够裂解细胞膜，改变与DNA结合蛋白的性质[1]。通常来说，常量检材基质中含有大量的金属离子，在低离子强度和加热条件下能够降解DNA，同时能够抑制PCR反应，因此在提取DNA时加入Chelex-100能够阻止DNA降解，同时提升PCR扩增率[2]。但此种方式在临床中也存在一定的不足，Chelex-100提取法检测很容易受到基质中杂质的干扰，导致部分DNA丢失。但其在实践中操作非常方便，且时间非常短，在提取的过程中无需更换试管，大大降低了污染发生率[3]。此外，在研究中也可以看出，低浓度的Chelex-100与高浓度Chelex-100提取的DNA浓度并无明显差异，因此可以认为低浓度Chelex-100能够有效的提取常量检材DNA，降低了不必要的浪费和污染。 　　有机提取法主要是采用饱和酚、氯仿等物质按照不同比例进行混合，而后提取DNA的方式。DNA非常容易溶于水中，但不溶于有机溶剂中[4]。此种提取方式提取的DNA纯度非常高，不会受到杂质干扰，但此种方式由于在提炼过程中需要利用大量有机试剂进行辅助，有机试剂多存在较大的毒性，会对人体造成影响，且容易造成环境污染。此外，