玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因酵母单杂交报告载体的构建.docVIP

玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因酵母单杂交报告载体的构建 摘要：根据玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）黑色素合成还原酶基因St3HNR、St4HNR 5′端侧翼序列和酵母单杂交报告载体pHIS2.1多克隆位点，设计了带有限制性内切酶位点的特异性引物，并以玉米大斑病菌01-23菌株基因组DNA为模板，PCR扩增启动子区域长度约1 000 bp的片段，双酶切目的片段及载体pHIS2.1回收并连接，构建2个还原酶基因的酵母单杂交报告载体。结果表明，克隆到启动子区域长度为998 bp核酸片段，经PCR检测、测序、酶切鉴定，2个还原酶基因的酵母单杂交报告载体构建成功，为进一步研究还原酶与转录因子互作关系及明确黑素素合成调控机制奠定了基础。 关键词：玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）；黑色素；酵母单杂交报告载体 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）14-3542-04 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.14.053 Construction of Report Vectors of Melanin HNreductase Gene of Setosphaeria turcica in Yeast One-hybrid JIA Hui， GUO Li-jie， MENG Qing-jiang， CAO Zhi-yan， SONG Ya-feng （College of Life Science， Agriculture University of Hebei/Hebei Key Laboratory of Physiological and Molecular Plant Pathology， Baoding 071000， Hebei， China） Abstract： According to the restriction enzyme sites of melanin biosynthesis promoter region of reductase gene St3HNR， St4HNR and reporter vector pHIS2.1 of Setosphaeria turcica， two pairs of primers containing restriction enzyme sites were designed， the fragment length about 1 000 bp obtained by PCR using genomic DNA of S.turcica 01-23 strain as templet， and double digested by the corresponding restricted enzymes respectively， recycled and connected， constructed the yeast one-hybrid reporter vector of reductase gene. The results showed that the fragment length of two genes were both 998 bp， vectors were successfully constructed by PCR， sequencing， restriction enzyme digestion， and lay the foundation for the study of the transcription factor. Key words： Setosphaeria turcica； melanin； report vectors of the yeast one-hybrid system 玉米大斑病是玉米（Zea mays L.）的重要叶部病害，病斑呈梭形，直接影响玉米的产量和品质，造成严重的经济损失[1]。玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）是引起玉米大斑病的一种丝状病原真菌，在其侵入寄主过程中，主要依靠附着胞产生机械压力穿透植物表皮细胞[2，3]。成熟的附着胞内沉积着一层黑色素，黑色素是由病菌产生的一种非均质的不溶于水的无定形小颗粒状类多酚聚合体，其作为重要的毒力因子，在维持附着胞内机械压力方面起着重要的作用。玉米大斑病菌能够代谢DHN黑色素，其在病菌附着胞壁上的沉积，保证了病菌能够产生足够的膨胀压力而穿透寄主组织致病[4]。对不同病原真菌中DHN黑色素合成途径的研究结果表明，DHN黑色素合成途径起始于聚酮体合成酶（Polyketide synthase），其后经2个还原酶（HN